糖皮質(zhì)激素對大鼠激素性壞死股骨頭內(nèi)主要成骨調(diào)控基因表達的影響.pdf

1、目的：通過糖皮質(zhì)激素誘導Wistar大鼠股骨頭壞死模型,研究調(diào)節(jié)成骨細胞分化和成熟關(guān)鍵基因Runx2(runt-related transcription factor-2)、Osterix及AJ18在不同時期激素性壞死股骨頭組織中的表達及蛋白質(zhì)合成的變化情況,分析其在股骨頭壞死發(fā)病、進展過程中的作用,為研究激素性股骨頭壞死的發(fā)病機制提供新的理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。
　　 方法：按20mg/kg劑量交替經(jīng)大鼠雙側(cè)臀大肌注射地塞米松,

2、每周一次；注射地塞米松后放在實驗動物跑臺上每周兩次訓練,共8周,誘導大鼠激素性股骨頭壞死動物模型。HE染色光學顯微鏡觀察骨組織、骨髓組織、骨小梁結(jié)構(gòu)變化,分析每高倍視野單位面積下空骨陷窩率、單位視野面積內(nèi)骨小梁面積比、脂肪細胞直徑,確定造模成功。按時段提取大鼠股骨頭內(nèi)總RNA及總蛋白,采用實時熒光定量PCR方法從mRNA表達水平檢測激素性壞死股骨頭組織中Runx2、Osterix、AJ18及骨鈣素的表達情況,并用Westernblot方

3、法檢測各標本Runx2、Osterix、AJ18及骨鈣素蛋白表達,分析糖皮質(zhì)激素對其表達的影響及其在激素性股骨頭壞死發(fā)病、進展過程中的作用。
　　 結(jié)果：實驗第8周取股骨頭標本行病理學檢查,每高倍視野單位面積下空骨陷窩率(12.36％)、單位視野內(nèi)骨小梁面積(56.54％)、脂肪細胞最大直徑(24.52μm)均與正常組差異有統(tǒng)計學意義(p<0.5),造模成功。實驗8、10、12周時,實驗組大鼠股骨頭內(nèi)Runx2、Osterix及

4、OC的基因表達、蛋白合成較對照組減少,mRNA的表達量分別為正常組的0.9621、0.3259、0.0512,0.9661、0.2026、0.0194和0.2857、0.2027、0.1583,隨時間推移三者的基因表達、蛋白合成呈下降趨勢。實驗組大鼠股骨頭內(nèi)AJ18的基因表達、蛋白合成較對照組增多,AJ18mRNA的表達在實驗后8、10、12周分別為正常組的3.5487、3.6303、3.7576。
　　 結(jié)論：激素性股骨頭壞死

5、組織中Runx2/Osterix、OC在mRNA和蛋白表達水平均低于正常股骨頭組織,AJ18高于正常股骨頭組織,糖皮質(zhì)激素可能通過下調(diào)Runx2/OsterixmRNA和上調(diào)AJ18mRNA來抑制成骨細胞活性,抑制骨形成和骨修復,促進骨吸收,導致激素性骨質(zhì)疏松和股骨頭壞死；或者先造成骨質(zhì)疏松后,骨強度下降,應(yīng)力作用下骨小梁微骨折引起骨小梁超微結(jié)構(gòu)的改變,繼而出現(xiàn)骨修復和應(yīng)力作用下骨改建,隨時間推延,此病理過程反復發(fā)生,最終導致股骨頭壞死