不同程度面神經(jīng)損傷急性期面神經(jīng)核病理變化與突觸后密度蛋白95表達(dá)：半定量分析.pdf

1、背景：越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)突觸后密度蛋白-95(postsynapticdensity protein 95，PSD-95)在各種神經(jīng)系統(tǒng)病變中都有較為明顯的表達(dá)變化，并己證實(shí)其與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育、感覺(jué)信號(hào)傳遞、缺血性腦損傷等各種急慢性神經(jīng)細(xì)胞死亡相關(guān)。于是有學(xué)者嘗試研究PSD-95與周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)的關(guān)系，以期找到新的治療周?chē)窠?jīng)損傷的靶點(diǎn)。 目的：采用免疫組化方法半定量方法觀察SD鼠面神經(jīng)不同程度損傷后，面神經(jīng)元的凋亡形態(tài)改變及

2、PSD-95在面神經(jīng)核中的表達(dá)變化。 設(shè)計(jì)、時(shí)間及地點(diǎn)隨機(jī)對(duì)照動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，于2007-9/12在重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院超聲研究所完成。 材料：普通級(jí)健康成年遠(yuǎn)交群(sprague dawley,SD)大鼠，雌雄不拘，鼠齡3個(gè)月，體質(zhì)量180～230g，由重慶醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供。兔抗鼠PSD-95多克隆抗體(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)，鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶-9001(streptomycete avidin-

3、peroxydase 9001，SP-9001)兔抗SP免疫組化染色試劑盒、3，3'-二氨基聯(lián)苯胺(3，3'-diaminobenzidine，DAB)試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)。 方法：取成年SD大鼠65只，隨機(jī)分為1個(gè)對(duì)照組(5只)和3個(gè)損傷組(每組20只)，損傷組分別在雙側(cè)面神經(jīng)干造成暴露、鉗夾及切斷3種不同程度損傷。于損傷后1、3、7、14d分別取出腦干。蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin，HE

4、)染色行組織學(xué)染色觀察面神經(jīng)核凋亡神經(jīng)元的形態(tài)變化，PSD-95抗體免疫組化染色，光鏡下放大400倍計(jì)數(shù)PSD-95標(biāo)記的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。主要觀察指標(biāo)觀察SD鼠面神經(jīng)不同程度損傷后，凋亡面神經(jīng)元的形態(tài)改變及PSD-95在面神經(jīng)核中的表達(dá)變化。 結(jié)果：①暴露組各時(shí)間點(diǎn)突觸后密度蛋白95表達(dá)與面神經(jīng)元形態(tài)均無(wú)明顯變化(P＞0.05)。鉗夾組、切斷組面神經(jīng)損傷后1d面神經(jīng)核突觸后密度蛋白95表達(dá)升高(P＜0.05)，7d時(shí)再次明顯增高(P

5、＜0.01)，14d時(shí)仍未見(jiàn)明顯下降；面神經(jīng)元在3d時(shí)呈現(xiàn)出凋亡變化，7d時(shí)尤其明顯，14d時(shí)依然沒(méi)有恢復(fù)的跡象。②在同一時(shí)間點(diǎn)不同損傷組面神經(jīng)核PSD-95陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和面神經(jīng)元凋亡的嚴(yán)重程度均為切斷組＞鉗夾組＞暴露組。 結(jié)論：①不同程度面神經(jīng)損傷后，面神經(jīng)核PSD-95表達(dá)水平隨損傷程度加重而增高；②損傷后PSD-95水平在ld和7d各出現(xiàn)1個(gè)高峰。由于損傷后1d正好是神經(jīng)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因激活的時(shí)間，而損傷后7d是激活基因蛋白