整合素αⅡbβ3信號傳導調(diào)控的分子機制.pdf

1、整合素家族是細胞粘附分子重要組成成員之一，由α和β兩個亞單位組成。根據(jù)整合素β亞單位的不同將整合素分為不同的組，整合素β3組即由整合素αIIbβ3和αvβ3兩種整合素組成。相較于αvβ3的廣泛表達，整合素αIIbβ3的表達更為特異，主要表達于巨核細胞及血小板的表面，是血小板膜的主要受體，被視為血小板活化、聚集的最終共同通路，參與血小板活化的雙向信號傳導。即以血小板初期粘附和第一相聚集為代表事件的內(nèi)向外信號傳導,以及以血小板穩(wěn)定粘附、伸展

2、、第二相聚集、釋放和血塊回縮等事件為代表的外向內(nèi)信號傳導。 本研究模擬體內(nèi)calpain對整合素β3尾部的切割選定了β3-△754、β3-△759、β3-△NITY幾種突變體，分別在真核細胞中構(gòu)建由IL-2Rα胞外段及跨膜段（Tac）與野生型及上述突變型整合素β3胞內(nèi)段組成的顯性負模型，以及利用逆轉(zhuǎn)錄病毒對小鼠造血重建的方法將上述幾種突變體在小鼠體內(nèi)血小板中表達，并借這些方法對整合素β3作用的分子機制進行體外及體內(nèi)不同層面的研究

3、。結(jié)果表明整合素β3胞內(nèi)最后三個氨基酸序列R760GT762是整合素外向內(nèi)信號傳導的充要條件，而N756ITY759氨基酸序列的缺失雖然在之前CHO細胞的截短變異體模型中對內(nèi)向外信號傳導起到影響，但在我們構(gòu)建的顯性負細胞模型中，無論是β3-△754還是β3-△NITY雖然都缺失了N756ITY759序列但卻都仍對野生型整合素αIIbβ3的內(nèi)向外信號傳導功能產(chǎn)生明顯競爭抑制作用。相較于之前的細胞模型，我們構(gòu)建的顯性負細胞模型更大程度地維持

4、整合素αIIbβ3的自然狀態(tài)，避免可能出現(xiàn)的由于構(gòu)象改變而產(chǎn)生的對整合素αIIbβ3受體功能的直接影響。這些結(jié)果提示，與整合素β3內(nèi)向外信號傳導起關(guān)鍵作用的信號分子與β3的作用位點應在N756ITY759序列之前，這與已知的talin對整合素β3內(nèi)向外信號轉(zhuǎn)導的重要性及其相互作用位點的結(jié)果一致。不過則有異于之前截短變異體細胞模型中取得的結(jié)果，這可能是由于存在除talin外的其他具有協(xié)同作用的信號分子或是由于截短突變直接造成的整合素β3結(jié)