nm23-h1轉(zhuǎn)染對肺癌細(xì)胞整合素分子表達(dá)的調(diào)控

1、中圍肺癌雜志 2 o ( } 4 年 4 月第 7 卷第o 期( ’ l 1 l I - JIu n g { P a n ( ~ r ． A p r i l2 O4 ． V o II ． N o· 研 究 生 專 欄 ·n m23 一 H轉(zhuǎn)染對肺癌細(xì)胞整合素 分 子表 達(dá) 的調(diào) 控 鄭 海霞 周清華 孫芝琳 覃揚(yáng) 朱 文 王艷 萍 孫 澤芳 車 國衛(wèi) 【 摘要】 目的 通過皋因轉(zhuǎn)染 方法將 n m2 3H。 基 因轉(zhuǎn)

2、入 r i m2 3H． 基 因缺 失的人高轉(zhuǎn) 移 細(xì)胞肺 癌細(xì) 胞株 L 9 9 8 1 ， 探討 n m2 3H基 因?qū)Σ腊┘?xì)胞 整合 素( i n t e g r i n ) 分 子表達(dá) 的調(diào) 控作剛 。方法 直 陽離 子指 質(zhì) 體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染技術(shù) ， 將 n m2 3 一 H： 基因?qū)巳烁咿D(zhuǎn) 移大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株 I9 9 8 1 ； 應(yīng) 半定 量 R ． I ‘ P C R技術(shù) 檢測 n m2 3H基因轉(zhuǎn)染前后 i n t

3、e g r i n口 1 、 i n t e g r i n3基因的 mR NA表達(dá) ； 利用流式細(xì)胞儀技 術(shù)檢 測 n m2 3t t基 因轉(zhuǎn)染前 后 i n t e g r i np 1 、 i n t e g r i np 3基因的蛋白表達(dá) 。結(jié)果 ( 1 ) 轉(zhuǎn)染后獲得穩(wěn)定 、 高效表達(dá) n m2 3H基因的轉(zhuǎn)基因肺 癌細(xì)胞株 1 ． 9 9 8 1 _ n m2 3H， 該細(xì)胞株 的 i n t e g r i np 1 、

4、i n t e g r i np 3mRN A 表達(dá)水平 顯著低 于原代細(xì) 胞株 1 ． 9 9 8 1 。( 2 ) 轉(zhuǎn)基因肺癌細(xì)胞株 1 ． 9 9 8 1 - n m 2 3H中 i n t e g r i np 1 、 i n t e g r i np 3 蛋 門表達(dá)水顯著低于原代細(xì)胞株 1 ． 9 9 8 1 ( P <0 ． 0 1 ) 。結(jié)論 n m2 3 一 H基因轉(zhuǎn)染能顯著下調(diào)人高轉(zhuǎn)移 大細(xì) 胞肺癌細(xì)胞株 1 ．

5、 9 9 8 1中 i n t e gr i nB l和 i n t e g r i nB 3mRN A和蛋白表達(dá) ． 表明 n m2 3H基因可通過 調(diào)控細(xì)胞 i n t e g r i n表達(dá)逆轉(zhuǎn) 人高轉(zhuǎn)移大細(xì) 胞 肺 癌 1 ． 9 9 8 1 細(xì)胞株的轉(zhuǎn)移潛能 ?！?關(guān)鍵詞】n m2 3H．人高轉(zhuǎn)移大細(xì)胞肺癌細(xì) 咆株 整臺 素轉(zhuǎn)移 【 中 圖分 類 號 】 Q 7 8 5Re g u l a t i o no fn m2 3

6、- - HIt r a n s f e c t i o no ne x p r e s s i o no fi n t e g r i n si nh u ma nh i g h 。 ’ me t a s t a s i sl a r g ec e l ll u n gc a n c e rc e l ll i n eL9 9 8 1ZH ENGHa7i a，ZHOU Q g h u a，Str N Zh i [ i n，QⅢ Y

7、a n g．ZH W ，W c，p77 }S UNZ e ／ a n gCHEG u o w e i ．Ke 3 、 L a b o r a t o r y( ) IL u n gC a me yMo l e ( ’ urBz o h , gvo jS ieln u HP r I )1c ea n dCa m e rCe n t e r．W e s tCh i n aH o s p i t a 1 ．Si c h “ “ 77Un

8、i v e r s i t y ．( ? h e n g du ． Sh “ “ ' ?6 1_4 1 ． P． R． ( 、 ^ l ' 7 1 ~ ZC o r r e s p o n dz n ga u t h o r：ZHOU QⅢ h “ “， E- ma iL ：z h o u q h @ ma d． ”． c h i n／ (． ! t e l[ A b s t r a c t ] O b j e c t

9、i v eT os t u d yt h er e g u l a t i o no fn m2 3 一 H1g e n eo nt h ee x p r e s s i o no fi n t e g r i n si nh u ma nh i g hme t a s t a s i sl a r g ec e l ll u n gc a n c e rc e l ll i n e1 ． 9 9 8 lb yt r a n s f e

10、 c t i n gn m2 3 一 H li nt oc e l 1 ． M e t h o d sI A p o f e c twa su s e dt ot r a n s f e c tn m2 3t t li n t ot h eI9 9 8 lc e l 11 i n e ；s e mi — RT P CR Wa Su s e dt ( 1d e t e c tt h ed I f f e r e n c eo fl p

11、 ．t e g r i np la n di n t e g r i np 3mRNAe x p r e s s i o n sb e t w e e nt r a n f e c t e da n dn o nt r a n s f e ct ( 、 dc e l ll i n e s ；f i ~ wc y t o me t r yw a su s e dt od e t e c tt h ed i f f er e n c eo

12、fi n t e g r i np 1a n di n t e gr i np 3p r o t e i ne x pr e s s i o n sb e t w e e nt r a n s f e c t e da n dn o nt r a n s f e c t e dc e l ll i n e s ．Re s u l t s ( 1 )A tr a n s g e n i cc e l ll i n e1 ． 9 9 8

13、1n m2 3 一 H1wa so t } t a i n e d ．wh i c hc o u l ds t a b l ya n de f f e c t i v e l ye x p r e s sn m2 3HI ．Th emR NAe x p r e s s i o n so fi n t e g r i np la n di nI ． ． 9 9 8 1n m2 3Hlc e l ll i n ew e r er e m a

14、 r k a b l yl o w e rt h a nt h o s ei n1 ． 9 9 8 lc e l ll i n e ． ( 2 )Th ep r o t e i ne x p r e s s i o n so fi n t e gr i n' a la n dG 3i nI9 9 8 1 一 n m2 3H1c e l I 1 i n ewc r es i g n i f i c a n t l yl o we

15、rt h a nt h o s ei nI9 9 8 1c e l ll i n et o o ( P0 O ． 0 1 ， ．C o n c l u s i o nTr a n s f e c t i o no fn m2 3 一 H lg e n ei n t ot h e1 ． 9 9 8 1c e l ll i n ec a ns i g n i f i c a n t l yd o wn — r e g u l a t et

16、h emRNA a n dp r o t e i ne x p r e s s i o n so fi n t e g r i np 1a n dp 3i nt h i sc e l ll i n e ， wh i c hi n d i c a t e st h a tn m2 3 一 t t lma yr e v e r s et h eme t a s t a s i sp ot e n t i a 1o fI9 9 8 lc e

17、 l l1 i n et h r o u g hmo d u l a t i o no fi n t e g r i ne x p r e s s i o n ．[ K e yw o r d s ] n m2 3 一 H1Hu ma nh i g hm e t a s t a s i sl a r g ec e l ll u n gc a n c e rc e l ll i n eI n t e g r i n sMe —t a s t

18、 a s i sTh i swo r kwa ss u p p o r t e db yag r a n tf r o m t h eNa t i o n a lNa t u r a lS c i e n c e sF o u n d a t i o no fCh i n a( t oZH( ) LQi n g h u a ) ( No ． 3 0 0 7 0 3 3 3 ) ．腫 瘤轉(zhuǎn) 移是腫瘤 最 重 要 的惡 性 特征 ， 也

19、是 導(dǎo)致 腫 本研 究 受 國 家 自然 科 學(xué) 基 金 ( N o ． 3 0 0 7 O 3 3 3 ) 資助 作者單位 ： 6 1 0 0 4 l成都， 四J IJ 大學(xué)華西醫(yī)院四J I } 省肺 癌分子重點(diǎn)實(shí)驗(yàn) 室 、 腫瘤 中心 ( 通 訊 作 者 ： 嗣清 華 ． Ema i l ：z h o u q h @ ma i l ， s c ． c n mf o ， n e t )瘤患 者死 亡 的 最 主要原 因 。腫瘤 細(xì) 胞

20、 一 旦 脫 離 原 發(fā) 灶 ， 它將 跨過 基底 膜 ， 穿 過 問質(zhì) ， 從而 進(jìn) 入血 液 。腫 瘤 轉(zhuǎn)移是 一個(gè)極 其復(fù) 雜的多 基 因調(diào) 控 的多階段 多步 驟過 程 ， 它涉及細(xì)胞外基質(zhì)蛋白酶的作用 和能識別細(xì)胞外 維普資訊 http://www.cqvip.com 中網(wǎng) 肺癌 雜 志 2 ( 】 _ ) 4年 4廠 】 第 巷第 期 ( T h i nl1u n g【 、 } l t K(r ．、 } 】 1 i l4 ．

21、V o 1 ．，o ． 22 ． 3L 9 9 8 1和 L 9 9 8 1n m2 3H細(xì) 胞 株 中 i n t e g r i nf 3 1和 i n t e g r i n3蛋 白 表達(dá) 水 平 的 比較 轉(zhuǎn) 基 因 細(xì) 胞 侏 1 , 9 9 8 ln m2 3H巾 i n t e g r i n1和 i n t e g r i n3蛋 白表 達(dá) 水平均顯 菩低 _ f代怖 癌 細(xì) 咆株 1 ． 9 9 8 l ( P0 ．

22、0 5 )( 圖 3 )圖 3 肺 榴 細(xì)胞 侏 I9 ‘ ) 8 lt 1 tT 1 23Hf ¨l㈣ 8 1【 ¨i n t e g r i ni ? 1和 i n t c g r i n8 3的 蛋 白 表達(dá) Fi g3Pr o t e i ne x p r e s s i o no fi n t e g r i n8Ja n di n t e g r i n8 3i n1 ． 3 9 8 1n m2 3 一H

23、 1a n dI99 8 lc c ¨ 1 i ne s3 討論 腫瘤轉(zhuǎn) 侈是腫 瘤細(xì)胞 與周 圍環(huán)境 的一 系列復(fù)雜 的相互 作 用過 程 。腫瘤 轉(zhuǎn)移 過程包括 腫瘤細(xì) 胞從原 發(fā)腫 瘤部 位脫 離 ， 腫瘤 細(xì)咆與 細(xì)胞外基 質(zhì)蛋 白的粘 附 ， 周 圍組織 基 質(zhì)蛋 白的 降解 ， 腫 瘤 細(xì) 胞進(jìn) 入淋 巴或 血液循 環(huán) 系統(tǒng) ， 在淋 巴或血液循 環(huán)系 統(tǒng) 中游走 ， 到達(dá) 遠(yuǎn)處部位 停 留． 以及繼 發(fā)忡 瘤處

24、細(xì) 胞 的無 控 制繁 殖 腫瘤 細(xì) 胞 向周圍組 織 隉襲是 轉(zhuǎn)移 過 程 中 首免事 件 和 重要 過 程 ，體外實(shí)驗(yàn)表 明侵 襲 依賴于 細(xì)胞 與細(xì)胞 外 基質(zhì) 的粘附 ! 。腫 瘤侵襲 是 一1 ＼ 極 其復(fù) 雜 的多 基 因 調(diào)控過 程 ，腫瘤 細(xì)胞和其 周 圍組織 器官均 會 發(fā)生 一 系列 病理和 生 理改變 ， 并受許 多 正性 和 負(fù)性 調(diào)控 基 因 的調(diào) 控 。 目前 已知 n m2 3 一 H基 因是參 與調(diào)控

25、肺 癌 侵襲 過 程 中的 一 個(gè) t分 重 要 的 基 因。n m2 3 一 H基 因是 一 種腫 瘤 轉(zhuǎn) 移抑制 基 因 ， n m2 3 一 H基 因的低 表 達(dá) 和雜 合性 缺失 與肺癌 的高轉(zhuǎn)移性 和預(yù)后 不 良有 密 切關(guān)系 。我們 在前期 工作 中將 n m2 3 一 H基 因 導(dǎo)入 n m2 3H基l 夭 】 缺 失 的人大細(xì)胞 肺癌細(xì) 胞株 1 ． 9 9 8 1中 ， 發(fā)現(xiàn) n m2 3H可 顯著降低 1 ． 9

26、9 8 l 細(xì) 胞株 的粘附 和侵襲 潛 能 。 從 而逆 轉(zhuǎn) 怖癌 的轉(zhuǎn)移表 型 j 。本 研究 的 目的 旨在 從分子 水平 探 討 n m2 3 一 H基 因逆 轉(zhuǎn) 人 高 轉(zhuǎn) 移 大 細(xì) 胞 5 市癌 細(xì) 胞 株 1 ． 9 9 8 1 侵襲能力的確切機(jī)理， 以及對粘附分子 i n t e g r i n表 達(dá)有何 影 響。i n t e g r i n是 由、 f 3 亞 單位 組成 的異二 聚體 ， 是跨 膜 粘 蛋 白受體

27、 ， 屬 于細(xì) 胞 粘附 分 子 。 目前 已知哺 乳 類動 物細(xì) 胞共有 1 6種 i n t e g r i n和 9 種 i n t e g r i n0 亞 單位 ，不 同的 i n t e g r i n和 8亞單位組 成至少 2 O余種 不 同的 i n t e g r i n分子 。i n t e g r i ni 3 1主 要 介 導(dǎo)細(xì) 胞 與細(xì) 胞外 基 質(zhì) 的粘附 ， 其 配體分 別是細(xì) 胞外基 質(zhì) 中的膠 原 、

28、纖維 連 接 蛋 白 、 層粘連 蛋 門 、 纖維 蛋 門原等 腫瘤 細(xì)胞 粘附能 勻的 變忡瘤轉(zhuǎn) 移最 微妙 的環(huán) 節(jié)之 · ． i n t e g r i n可 以 凋 節(jié) 9 中瘤 絀 咆 的 粘 附 能 ／ f J 。在 許 多腫瘤 中 ， i n t e g r i nl的 表 達(dá) 水 平 與忡 瘤 的轉(zhuǎn) 移 呈 正相關(guān) 在 乳 腺 癌 中 ． 具有 高轉(zhuǎn) 移 力的 腫 瘤 中 i n t eg r i na 2 f

29、 3 l 、 a 3 f 3 1 、 a 6 f 3 1 、 a v1的 表達(dá) 丟失或失 活 ， 使腫瘤 細(xì)咆膜的粘附作 _ 用降 低。 從而使腫瘤細(xì)胞 易 f脫落 ． 促進(jìn) 轉(zhuǎn) 侈 。 t t a n等 f f j 龜疫 組 化研 究 r6 8例 非 小細(xì)胞肺癌 中 i n t e g r i nI { 1的 表達(dá) ． 發(fā)現(xiàn) 淋 巴結(jié) 轉(zhuǎn) 移 與 盅 】的表達(dá) 增 加 有 足， 、還 有 研 究 表明 ． 肺 癌 中 i i ／ l

30、_ eg r i n3 1 啞 單位表 達(dá)增 加 ． 則 分化 低。 與預(yù) 下 良相關(guān) i n t e g r i nf 3 3家 族 有 aU3陽 a v } 3 3兩 種 ， 高 水 平 的 8 3表達(dá) 與腫瘤 侵襲 和轉(zhuǎn) 移 密 切相 關(guān) ， 口 』 能 與 l 3 3促 進(jìn) 新 生血管 形 成 尤其 是9 中慵 新 生 血 管 形 成 的 作 用 有 關(guān) 。血管生成 不僅 促 進(jìn) r發(fā)瘤 的生 長 ． 而且 增 加 了瘤 細(xì) 咆

31、人 血 的 機(jī) 會 ． 促進(jìn) 轉(zhuǎn) 侈。有 研 究 發(fā) 現(xiàn) ． 用 i n t eg r i nl 3 3轉(zhuǎn)染 黑 色 素 細(xì)胞 可 啟 動 細(xì) 咆 遷 移 和轉(zhuǎn) 移 用 免疫 組化 法 分析 也 發(fā)現(xiàn) ， i n t e g r i na v3在4 市 癌 、 結(jié) 暢 癌 、 胰腺癌 和 乳 腺 癌 的 m管 生 成 時(shí) 夷達(dá)增 加 ’ ． 提 示j n t e g r i n參 與腫瘤 I 】 i L 管 乍成 ． 促進(jìn)轉(zhuǎn) 移 我們

32、的早期研 究 示 ． 轉(zhuǎn) 染 rn m2 3H的細(xì) 胞 侏 粘 附侵襲能 力 下降 ． 奪研 究 喟 流式 細(xì)胞 儀槍洲 到 i n —t e g r i n1 、 f j 3啞單 蛋 白 表達(dá) 減 弱 。 而 R TP C R 結(jié) 果顯示 1 、 3 3皿 單位 t uRNA 表達(dá) 也 降 低 ． 提 示 i n t e g r i nf 3 1 和 3的表 達(dá) 與9 中 瘤 細(xì) 胞 惡 性 表 型 有 關(guān) ． 而 n m2 3H是通

33、 過改 變 i n t e g r i n的 表達(dá) 來 實(shí) 現(xiàn) 對肺 癌 細(xì) 咆 惡 性 表 的逆 轉(zhuǎn) ， i n t e g r i n1稈 】3可 能 是 n l n 2 3H基 因 的 下游綦 因 ． 通過 改 變細(xì) 咆 的粘附能 力 、 促進(jìn) 血管 生 成 等機(jī)制 調(diào)控 腫瘤生 總之 ． n m2 3H轉(zhuǎn) 染 口 f 以 卜凋 肺 癌 細(xì) 胞 i n t e g r i n分 子 的表達(dá) 。 一方 面可解 釋 n m2 3H逆

34、轉(zhuǎn)怖 癌細(xì) 胞 惡 性 表型 的機(jī) 制 ； 另 一力 ‘ 面 ， 亦有 助 于指 導(dǎo)臨床 玎發(fā)治療 腫 瘤轉(zhuǎn)移 的新藥 物 ， 具有潛 在的 用前景 。參 考 文獻(xiàn) 船精．～．一 一 一 一 一 一 一 一一 一 一 一 ～D：9 m、 1 = |“ ∞ ¨u，g= 三l 三 洲_ 喜畔 n一¨～二 三一一一 一 一 一 一 一 ～ 一 一 一 ～ ～ 一 ～一 ．?一m二 = ～一Ⅲ 一一 ～ 一 ～ 一