FHL2蛋白在牙周膜細胞礦化過程中表達的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 人牙周膜細胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)作為牙周組織中的主要的功能細胞,具有多向分化潛能,包括向成骨細胞、成牙骨質細胞及成纖維細胞分化潛能。研究表明許多因子及小分子蛋白能夠調控牙周膜的分化過程,在創(chuàng)傷修復和組織再生中發(fā)揮重要作用。
　　 FHL2屬于LIM蛋白超家族下LIM-only亞類。其中人FHL類蛋白分子結構中僅含有4個半LIM域,而FHL2是該類

2、研究最深入的成員。目前已知在成骨細胞中FHL2有高表達,尤其是在骨髓細胞向成骨細胞分化時表達量可增加3倍。研究證明FHL2可提高轉錄因子Runx2的轉錄活性,而Runx2是調節(jié)成骨細胞功能的一個關鍵的因子。因此我們推測FHL2蛋白可能在牙周組織再生中發(fā)揮一定作用。但目前尚未見關于FHL2對牙周膜分化影響的報道。
　　 本研究在體外培養(yǎng)人牙周膜細胞的基礎上,觀察胞內(nèi)信號轉導分子FHL2蛋白在人牙周膜細胞體外礦化過程中的表達,初步探

3、討其在牙周組織再生中可能的作用。
　　 方法:
　　 牙周膜細胞來自因正畸需要而拔除的健康前磨牙。利用組織塊法體外培養(yǎng)人牙周膜細胞。取4～6代細胞用于實驗。實驗組培養(yǎng)液中加入礦化誘導劑,對照組不加礦化誘導劑。
　　 1.礦化培養(yǎng)0d、14d、28d后,茜素紅染色檢測礦化結節(jié)的形成；免疫細胞化學法檢測蛋白水平上FHL2的表達；
　　 2.同時采用半定量RT-PCR技術檢測礦化0d、14d、28d FHL2

4、mRNA的表達。SPSS11.0軟件分析結果。
　　 結果:
　　 1.牙周膜細胞培養(yǎng)14天開始,礦化組茜素紅染色陽性,礦化結節(jié)形成；未礦化組茜素紅染色陰性。
　　 2.免疫細胞化學結果顯示牙周膜細胞礦化誘導培養(yǎng)14天后FHL2蛋白呈強陽性表達,對照組為相對較弱的陽性表達。
　　 3.RT-PCR顯示牙周膜細胞礦化誘導0、14、28天相比,均有FHL2 mRNA的表達,其中14天時表達最高,約為0天時的1