IL-1β干預(yù)下TRAF6在牙周膜成纖維細胞中表達的研究.pdf

1、目的： 原代培養(yǎng)人牙周膜成纖維細胞，建立人牙周膜成纖維細胞的體外模型；觀察在不同濃度組的IL-1β干預(yù)下，腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TRAF6)在人牙周膜成纖維細胞中的表達狀況，為細胞因子網(wǎng)絡(luò)對細胞功能的調(diào)控提供新資料。 方法： 利用組織塊培養(yǎng)法對人牙周膜成纖維細胞進行體外分離培養(yǎng)，并對其進行形態(tài)學(xué)及免疫組織化學(xué)鑒定。選取5～8代生長穩(wěn)定的人牙周膜成纖維細胞，分別以0ng/ml、0.1ng/ml、0.5ng/m

2、l、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml的IL-1β對細胞進行干預(yù)，采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)法及免疫組織化學(xué)方法檢測TRAF6在細胞中的表達狀況，利用計算機圖像分析系統(tǒng)對檢測結(jié)果進行圖像及數(shù)據(jù)的采集，并對實驗數(shù)據(jù)采用單因素方差分析法進行統(tǒng)計分析，觀察TRAF6在不同濃度的IL-1β干預(yù)下在細胞中的定位及表達特點。 結(jié)果： (1)人牙周膜成纖維細胞培養(yǎng)并傳代成功，5代后細胞生長穩(wěn)定，倒置顯微鏡下觀察，細胞為星形或長梭形

3、，為典型的成纖維樣細胞形態(tài)：免疫組織化學(xué)染色觀察，細胞抗波形絲蛋白染色陽性，抗角蛋白染色陰性，符合人牙周膜成纖維細胞的生物學(xué)特性。 (2)RT-PCR及免疫組化結(jié)果顯示：在基因及蛋白水平上，TRAF6在正常的人牙周膜成纖維細胞中未見陽性表達，而在IL-1β干預(yù)后的細胞中可見胞漿表達陽性，且其表達強度隨IL-1β干預(yù)濃度的升高呈現(xiàn)增強的趨勢。 結(jié)論： (1)組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)細胞步驟簡單易掌握，培養(yǎng)出的細胞符合牙周膜