單肺通氣誘發(fā)肺損傷時(shí)兔肺組織線粒體轉(zhuǎn)錄因子A表達(dá)的變化及烏司他丁的干預(yù)效應(yīng).pdf

1、目的:開胸術(shù)中長(zhǎng)時(shí)間單肺通氣可誘發(fā)肺損傷，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致患者術(shù)后發(fā)生肺水腫、呼吸困難等并發(fā)癥[1]。探討其病理機(jī)制對(duì)臨床防治工作具有重要意義。研究表明，肺損傷可損害線粒體DNA(mtDNA)，導(dǎo)致線粒體功能障礙[2]。線粒體轉(zhuǎn)錄因子A(mtTFA)是線粒體DNA復(fù)制的重要啟動(dòng)子[3]。mtTFA蛋白高表達(dá)可穩(wěn)定mtDNA動(dòng)態(tài)水平，對(duì)維持mtDNA數(shù)量穩(wěn)定具有重要意義[4]。研究表明，烏司他丁可通過清除氧自由基減輕肺損傷的作用[5]。本研究擬

2、評(píng)價(jià)單肺通氣誘發(fā)肺損傷時(shí)兔肺組織線粒體轉(zhuǎn)錄因子A表達(dá)的變化，及烏司他丁干預(yù)的影響，以進(jìn)一步闡明單肺通氣誘發(fā)肺損傷的機(jī)理及烏司他丁產(chǎn)生肺保護(hù)的機(jī)制，為臨床安全實(shí)施單肺通氣，減輕肺損傷，加強(qiáng)肺保護(hù)提供理論依據(jù)。
　　 方法:健康雄性新西蘭大白兔24只，體重2.5～3.0kg，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。采用隨機(jī)數(shù)字表法，將兔隨機(jī)分為3組(n=8):雙肺通氣組（D組）、單肺通氣組（O組）、烏司他丁干預(yù)組（U組）。動(dòng)物常規(guī)禁食12h

3、，禁水8h。3％的戊巴比妥鈉30mg/kg耳緣靜脈麻醉后，行右側(cè)股動(dòng)脈和左側(cè)股靜脈插管術(shù)，動(dòng)脈插管用于有創(chuàng)動(dòng)脈壓監(jiān)測(cè)，靜脈插管用于補(bǔ)液和采集血標(biāo)本。局麻浸潤(rùn)下氣管切開插入自制雙腔氣管插管行機(jī)械通氣。D組雙肺通氣3h，O組和U組左肺通氣2h后再雙肺通氣1h。三組通氣參數(shù)為:雙肺通氣VT為24ml、單肺通氣VT為12ml、FiO2100％，通氣頻率40次/min，I∶E為1∶2。U組于插入自制雙腔氣管插管即刻靜脈注射烏司他丁50kU/kg，

4、D組和O組靜脈注射等量生理鹽水。于通氣開始即刻(T0)、通氣1h(T1)、通氣2h(T2)、通氣結(jié)束即刻(T3)采集動(dòng)脈血進(jìn)行動(dòng)脈血?dú)夥治?，測(cè)定PaO2，根據(jù)公式氧合指數(shù)=PaO2/FiO2計(jì)算氧合指數(shù)。通氣結(jié)束后開胸，取雙側(cè)肺尖部組織，一分為二，一半置于液氮凍存24h后轉(zhuǎn)-80℃保存待測(cè)，另一半置于4℃、4％多聚甲醛中固定待測(cè)。4％多聚甲醛中固定肺組織常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色觀察病理學(xué)結(jié)果，行肺組織病理學(xué)評(píng)分及免疫組化法檢測(cè)兔肺組織

5、mtTFA表達(dá)。-80℃保存肺組織用于化學(xué)比色法檢測(cè)肺組織MDA含量、SOD活性及Westernblot法檢測(cè)兔肺組織mtTFA表達(dá)。
　　 結(jié)果:1、與D組比較，O組、U組T2，3時(shí)氧合指數(shù)下降(P＜0.05)，與T1比較，T2，3時(shí)O組、U組氧合指數(shù)下降(P＜0.05)。
　　 2、光鏡下D組雙側(cè)肺組織肺泡結(jié)構(gòu)基本完整，肺泡腔內(nèi)無明顯滲出、出血、間質(zhì)增厚、炎性細(xì)胞浸潤(rùn);O組左側(cè)肺組織肺泡結(jié)構(gòu)破壞，肺泡腔內(nèi)少量滲出物，

6、少量出血，間質(zhì)輕度增厚，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較少。O組右側(cè)肺組織大部分肺泡結(jié)構(gòu)消失，肺泡腔內(nèi)有滲出較多，出血多，間質(zhì)明顯增厚，炎性細(xì)胞較多;U組左右側(cè)肺組織比O組左右側(cè)肺組織損傷程度輕。
　　 3、D組雙側(cè)肺組織組織病理學(xué)評(píng)分、SOD活性、MDA含量及mtTFA表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，與O組左側(cè)比，O組右側(cè)肺組織病理學(xué)損傷評(píng)分升高、SOD活性降低、MDA含量升高、mtTFA表達(dá)下調(diào)(P＜0.05);與D組左側(cè)比，O組左肺組

7、織病理學(xué)損傷評(píng)分升高、SOD活性降低、MDA含量升高、mtTFA表達(dá)下調(diào)(P＜0.05)，與D組右側(cè)比，O組右肺組織病理學(xué)損傷評(píng)分升高、SOD活性降低、MDA含量升高、mtTFA表達(dá)下調(diào)（P＜0.05）。
　　 4、與O組右側(cè)肺組織相比較，U組右側(cè)肺組織病理學(xué)損傷評(píng)分下降、SOD活性升高，MDA含量明顯下降，肺組織mtTFA表達(dá)上調(diào)(P＜0.05)。與O組左側(cè)肺組織相比較，U組左側(cè)肺組織病理學(xué)損傷評(píng)分下降、SOD活性升高，MDA