單肺通氣誘發(fā)肺損傷時兔肺組織核因子NF-E2相關(guān)因子2表達的變化及姜黃素的干預(yù)效應(yīng).pdf

1、目的:單肺通氣(OLV)是指患者開胸后只利用非手術(shù)側(cè)肺進行通氣的方式。OLV時非通氣側(cè)肺萎陷，為術(shù)者提供良好視野方便操作的同時還具有防止兩肺間交叉感染等優(yōu)點。但單肺通氣時間過長可以誘發(fā)急性肺損傷。姜黃素是自姜黃根莖中提取的活性成分，研究表明姜黃素可減輕單肺通氣所誘發(fā)的肺損傷[2]，但作用機制尚不清楚。核因子NF-E2相關(guān)因子2（Nrf2）是機體內(nèi)調(diào)節(jié)氧化/還原反應(yīng)和炎性反應(yīng)的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄因子，研究發(fā)現(xiàn)Nrf2在急性肺損傷中發(fā)揮著重要的作用

2、。本研究擬評價姜黃素預(yù)先給藥對單肺通氣兔肺組織Nrf2蛋白表達的影響，為明確姜黃素減輕單肺通氣所誘發(fā)肺損傷機制提供參考。
　　方法:健康成年雄性新西蘭大白兔24只，體重2.5～3.0kg，由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。采用隨機數(shù)字表法，將其隨機分為3組（n=8）:雙肺通氣組(TLV組)、右肺單肺通氣組（OLV組）、姜黃素預(yù)先給藥組(Cur組)。
　　取兔稱重后經(jīng)右耳緣靜脈注射3％戊巴比妥鈉30mg/kg麻醉，麻醉成功后游離

3、右股動脈行穿刺置管術(shù)用于監(jiān)測平均動脈壓(MAP)及術(shù)中采集動脈血樣。2％鹽酸利多卡因局部浸潤麻醉下切開頸部皮膚，游離右頸內(nèi)靜脈行穿刺置管術(shù)用于術(shù)中補液及給藥。選擇ID3.0mm氣管導(dǎo)管，行氣管切開術(shù)后，TLV組氣管導(dǎo)管置入氣管行雙肺通氣，OLV組和Cur組氣管導(dǎo)管置入右主支氣管行單肺通氣。通過觀察右側(cè)胸廓運動的變化、聽診雙肺呼吸音及監(jiān)測氣道壓力的變化來判斷和調(diào)整導(dǎo)管的位置。氣管插管成功后，TLV組雙肺通氣3h，OLV組和Cur組右肺單肺

4、通氣3h，3組動物均采用容量通氣模式，F(xiàn)iO2100％，調(diào)整通氣參數(shù)維持SPO2＞90％。所有動物均右側(cè)臥位，穩(wěn)定10min后右頸內(nèi)靜脈注射維庫溴銨0.1mg/kg，待自主呼吸消失后連接呼吸機行機械通氣。OLV組和Cur組均先單肺通氣50min，再雙肺通氣10min（通氣參數(shù)不變，將導(dǎo)管退至氣管內(nèi)），再重復(fù)上述通氣過程。同時兩組均在左側(cè)胸壁5～6肋間處開一大小約1cm小口至胸腔，用于觀察左肺組織的萎陷及復(fù)張情況。實驗過程中間斷靜脈給予維

5、庫溴銨0.1mg/kg維持肌松，必要時靜脈追加3％戊巴比妥鈉1ml維持麻醉，以10ml·kg-1·h-1的速率自右頸內(nèi)靜脈持續(xù)泵注乳酸鈉林格氏液，以補充實驗過程中所造成的體液丟失，維持MAP穩(wěn)定。于通氣開始即刻(T0)、通氣1、2、3h(T1-3)采集右股動脈動脈血樣進行血氣分析，測定PaO2并計算氧合指數(shù)(OI)，計算公式:OI=PaO2/FiO2。通氣結(jié)束后采用股動脈快速放血法處死動物，取雙肺下葉約1cm×1cm×2cm大小肺組織并

6、一分為二，一半用液氮凍存24h后轉(zhuǎn)-80℃冰箱保存待測，另一半用4℃4％多聚甲醛溶液固定待測。將剩余肺組織稱濕重后置于烤箱中(80℃，72h)烘烤，恒重后稱干重，計算雙肺濕/干重比（W/D比）。
　　取4％多聚甲醛溶液中固定肺組織，常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片及HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察病理學(xué)結(jié)果并行肺組織病理學(xué)損傷評分，免疫組織化學(xué)法檢測兔肺組織Nrf2蛋白表達。-80℃保存肺組織采用化學(xué)比色法檢測丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化

7、酶(SOD)活性及Western blot法檢測兔肺組織Nrf2蛋白表達。
　　結(jié)果:
　　1.與TLV組比較，OLV組及Cur組T2,3時OI下降(P＜0.05);與T0時比較，OLV組及Cur組T2，3時OI下降(P＜0.05);與OLV組比較，Cur組T3時OI升高(P＜0.05)。
　　2.光鏡下TLV組雙側(cè)肺組織肺泡結(jié)構(gòu)基本完整，肺泡腔內(nèi)出血少，未見明顯滲出，間質(zhì)輕度增厚，炎性細胞浸潤較少;OLV組右側(cè)肺組織

8、肺泡結(jié)構(gòu)破壞，肺泡腔內(nèi)有少量滲出物，出血較少，炎性細胞浸潤較少，間質(zhì)增厚;OLV組左側(cè)肺組織大部分肺泡結(jié)構(gòu)消失，肺泡腔內(nèi)有明顯滲出，出血多，間質(zhì)明顯增厚，炎性細胞浸潤較多;Cur組右、左側(cè)肺組織較OLV組右、左側(cè)肺組織損傷程度輕。
　　3.TLV組內(nèi)雙側(cè)肺組織W/D比、肺組織病理學(xué)損傷評分、MDA含量、SOD活性和Nrf2蛋白表達水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);與TLV組右、左肺比較，OLV組及Cur組右、左肺W/D比、肺組

9、織病理學(xué)損傷評分、MDA含量、Nrf2蛋白表達水平升高，SOD活性降低(P＜0.05);與OLV組右肺比較，OLV組左肺W/D比、肺組織病理學(xué)損傷評分、MDA含量、Nrf2蛋白表達水平升高，SOD活性降低(P＜0.05)。
　　4.與OLV組右、左肺比較，Cur組右、左肺W/D比、肺組織病理學(xué)損傷評分、MDA含量下降，SOD活性、Nrf2蛋白表達水平升高(P＜0.05);與Cur組右肺比較，Cur組左肺W/D比、肺組織病理學(xué)損傷評