大鼠機(jī)械通氣誘發(fā)肺損傷時黏蛋白MUC5AC的表達(dá).pdf

1、目的：建立大鼠機(jī)械通氣誘發(fā)肺損傷模型，觀察青年雄性SD大鼠在機(jī)械通氣誘發(fā)肺損傷時黏蛋白MUC5AC、MUC5ACmRNA以及支氣管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α、IL-1β、IL-6的表達(dá)。探討MUC5AC在機(jī)械通氣誘發(fā)肺損傷中的作用，為臨床上減少和預(yù)防機(jī)械通氣相關(guān)肺損傷提供一定的理論依據(jù)和方法。
　　方法：健康清潔級青年雄性SD大鼠36只，6～8周齡，體重250～300g，采取隨機(jī)數(shù)表法，隨機(jī)分成三組(n=12)：對照組（C

2、組）、小潮氣量組（L組）和大潮氣量組(H組)。所有SD大鼠實(shí)驗前禁食12h，自由飲水。腹腔注射2％戊巴比妥鈉80mg/kg麻醉，左側(cè)頸內(nèi)動脈置管檢測BP，HR。右側(cè)頸外靜脈用于泵注維庫溴銨保持肌肉的松弛。氣管切開將14G聚乙烯氣管導(dǎo)管插入氣管并連接到小動物呼吸機(jī)上進(jìn)行機(jī)械通氣。C組行自主呼吸，其余同L組和H組。L組：潮氣量6ml/kg，H組：潮氣量20ml/kg。L組和H組呼吸頻率為80次/分，吸呼比1∶1，吸入氧濃度21％，通氣時間為

3、4h，呼氣末正壓為0。機(jī)械通氣完成后，頸總動脈取血測定各組大鼠動脈血?dú)夥治?，放血處死動物。在左肺進(jìn)行支氣管肺泡灌洗（2.5ml×3次）。使用回收的支氣管肺泡灌洗液(BALF)來測量炎性細(xì)胞因子的表達(dá);依照ELISA試劑盒說明書測定BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6含量。右肺上葉用4％多聚甲醛固定后制作石蠟包埋切片行HE染色，光鏡下觀察形態(tài)學(xué)變化，取右肺中葉肺組織稱濕重(W)，然后置于80℃烤箱烘烤24h，稱干重(D)，計算W/D

4、比，剩余右肺組織液氮冷凍后-80℃保存用于黏蛋白MUC5AC和MUC5AC mRNA的測定。免疫組化以及依照ELISA試劑盒說明書測定肺組織中MUC5AC的含量。PT-PCR檢測肺組織MUC5AC mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：與C組比較，L組肺組織結(jié)構(gòu)尚清晰，少量肺泡壁有增厚，少量肺泡內(nèi)出血、水腫，肺泡間隔基本正常，上皮細(xì)胞間可見少量杯狀細(xì)胞。H組肺組織結(jié)構(gòu)破壞，肺泡間隔增厚，肺泡腔內(nèi)可見大量紅細(xì)胞，大量炎癥細(xì)胞聚集，杯狀細(xì)胞大量化

5、生，有些管壁上皮細(xì)胞基本全為杯狀細(xì)胞，支氣管管腔內(nèi)分泌物明顯增加。與C組相比，H組BALF中中性粒細(xì)胞計數(shù)、肺組織W/D比值增加(P＜0.01)，PaO2降低(P＜0.01)，L組BALF中中性粒細(xì)胞計數(shù)、肺組織W/D比值及PaO2無顯著變化(P＞0.05);L組和H組TNF-α、IL-1β、IL-6、MUC5AC和MUC5ACmRNA表達(dá)增加(P＜0.05或P＜0.01);與L組比較，H組BALF中中性粒細(xì)胞計數(shù)、肺組織W/D比值增加