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文檔簡(jiǎn)介
1、尿微量白蛋白(MA)作為糖尿病、腎病、心血管疾病等慢性病的早期診斷指標(biāo),對(duì)其定量檢測(cè)有廣泛的臨床意義。因此,建立特異、靈敏的檢測(cè)尿微量白蛋白的方法具有重要意義。
本研究利用人血清白蛋白(HSA)制備抗HSA的兔多抗和小鼠單抗,并初步建立了基于尿微量白蛋白的雙抗體夾心免疫熒光及ELISA檢測(cè)方法。
采用HSA免疫大耳白兔制備免疫兔血清,并采用蛋白A親和層析柱純化,獲得高純度的兔多抗,效價(jià)測(cè)定達(dá)到1×106;同時(shí)
2、用HSA免疫BALB/c小鼠,取其脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合,經(jīng)克隆和間接ELISA篩選,篩選到六株能分泌抗HSA單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,其中三株效價(jià)高的雜交瘤株3F4、6F2和8B5制備腹水,經(jīng)過(guò)鑒定:三株單抗都識(shí)別同一抗原表位,且3F4的單抗亞類(lèi)是IgG2b(k型);采用蛋白G親和層析柱純化腹水,測(cè)定效價(jià)均達(dá)到1×107。
以兔多抗和鼠單抗為基礎(chǔ),初步建立了尿微量白蛋白的雙抗體夾心免疫熒光檢測(cè)方法和ELIS
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