人血清白蛋白熒光探針的研發(fā)與生物學(xué)應(yīng)用.pdf

1、人血清白蛋白是血漿中含量最豐富的蛋白質(zhì),約占到血漿中蛋白總量的50-60％。人血清白蛋白在維持人體健康中發(fā)揮著不可替代的重要作用。白蛋白由肝臟合成并快速釋放到血中,健康成人血中白蛋白的正常值范圍為35-55 g/L。但多種疾病都會(huì)導(dǎo)致血清白蛋白的水平下降。因此,人血中白蛋白的定量測(cè)定被廣泛用于臨床相關(guān)疾病的診斷。因此,準(zhǔn)確評(píng)判血漿白蛋白濃度對(duì)于臨床應(yīng)用意義重大。
　　目的:開發(fā)一種準(zhǔn)確度高,檢測(cè)靈敏,受環(huán)境干擾小,生物兼容性好、操

2、作簡(jiǎn)單、成本低的白蛋白熒光探針(E)-1-（2-二氰基甲烯基-3-氰基-5,5-二甲基呋喃)-2-（4-氨基苯基)-乙烯,簡(jiǎn)稱ACDM,并對(duì)其進(jìn)行生物學(xué)評(píng)價(jià)并應(yīng)用于生物樣品的檢測(cè)。
　　方法:(1)對(duì)ACDM的化學(xué)及物理穩(wěn)定性（包括pH、有機(jī)溶劑、溫度及結(jié)合速度等)進(jìn)行考證;(2) ACDM的蛋白選擇性及對(duì)內(nèi)源與外源性物質(zhì)的抗干擾性測(cè)定;(3)通過已知藥物替代法和jobs plot方法對(duì)ACDM與白蛋白結(jié)合位點(diǎn)的預(yù)測(cè),并運(yùn)用分子對(duì)

3、接和分子動(dòng)力學(xué)確定;(4)測(cè)定實(shí)際生物樣品:28例正常人血漿和HepG2細(xì)胞產(chǎn)白蛋白的定量,并通過BCG方法和蛋白組學(xué)方法進(jìn)行對(duì)照確認(rèn)。
　　結(jié)果:(1)最佳反應(yīng)pH為8.0,有機(jī)溶劑DMSO用量為1％,ACDM終濃度為20μM,溫度保持室溫下操作,體系反應(yīng)3s即可;(2) ACDM只對(duì)白蛋白產(chǎn)生熒光值響應(yīng),并且抗干擾性很穩(wěn)定;(3)確認(rèn)ACDM在白蛋白上的結(jié)合位點(diǎn)為非藥物位點(diǎn);(4)所測(cè)得血漿及細(xì)胞產(chǎn)白蛋白的含量與對(duì)照方法一致。