相思子毒素抗原、抗體制備及兩種免疫學檢測方法的建立.pdf

1、相思子毒素(abrin)，類似于蓖麻毒素(ricin)，是一種植物蛋白毒素，具有極強的細胞毒性作用，也是一種對公共安全存在潛在威脅的生物恐怖劑，因此，發(fā)展和建立特異、靈敏的檢測相思子毒素方法是十分急需、重要的。 本文經對相思子毒素的傳統(tǒng)提取純化方法的優(yōu)化、改進，建立了相思子毒素新的提純制備技術，獲取的天然毒素作為建立相應檢測方法的參考物質。利用大腸桿菌表達的重組相思子毒素A鏈蛋白制備了2種動物來源的多克隆抗體，建立了基于膠體金免

2、疫層析、雙抗體夾心生物素-親和素ELISA的相思子毒素快速、特異和靈敏的檢測鑒定方法。 首先，根據相思子毒素對半乳糖的特異性結合能力，采用親和層析技術將相思子種子中大部分雜質除去；由于在植物種子中蛋白毒素總是與凝集素并存，根據二者分子量的差異進行了凝膠過濾層析，去除凝集素，最終獲得天然相思子毒素純品，電泳純度為98％。 然后，利用大腸桿菌表達重組相思了毒素A鏈蛋白，經金屬螫合層析法純化后，將重組相思子毒素A鏈蛋白抗原免疫

3、大耳白兔、昆明小鼠，分別采集、純化兔血清多抗和鼠腹水多抗。接著利用兔抗重組相思子毒素A鏈和鼠抗重組相思子毒素A鏈多克隆抗體，結合標記技術，分別建立基于雙抗體夾心法的膠體金免疫層析檢測卡和基于生物素-親和素ELISA的定量檢測相思子毒素方法。膠體金與ELISA法的檢測靈敏度分別達到600ng/mL、0.06ng/mL；線性范圍分別為：30ng/mL～600ng/mL、0.06ng/mL～60ng/mL回收率分別80％～110％，66.7％