人β干擾素與人血清白蛋白融合蛋白的高產(chǎn)菌株篩選及制備工藝.pdf

1、β干擾素具有抗病毒、抗增殖和免疫調(diào)節(jié)作用，廣泛用于病毒性感染、惡性腫瘤、以及自身免疫性疾病的治療或?qū)嶒炐灾委?。但由于該藥物前體在人體內(nèi)半衰期較短，極大影響了其成藥性，給臨床應(yīng)用帶來很多的不便。針對以上問題，本研究室從構(gòu)建融合蛋白的角度出發(fā)作出了一系列相關(guān)的工作。本文利用研究室已構(gòu)建的IFNβ-HSA融合基因使其在巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)表達系統(tǒng)中得到了較高水平的表達，建立了一套實驗室級的發(fā)酵、純化工藝，達到了融合

2、蛋白純品批生產(chǎn)量200mg的水平，為該融合蛋白藥物的臨床前研究奠定了基礎(chǔ)。
　　 選用畢赤酵母GS115為宿主，利用營養(yǎng)缺陷型、抗生素G418和免疫斑點法的組合篩選得到的轉(zhuǎn)化子產(chǎn)量高達180 mg/L。經(jīng)Western Blot實驗驗證，表達出的融合蛋白在結(jié)構(gòu)上符合我們的要求。
　　 經(jīng)過對菌株的搖瓶表達條件優(yōu)化，利用有機培養(yǎng)基，接種、培養(yǎng)至36h后轉(zhuǎn)入pH6.0、甲醇濃度2％、誘導(dǎo)濃縮比3：1的條件下誘導(dǎo)表達，可得到2