SARS-CoV實(shí)驗(yàn)滅活疫苗免疫效果評(píng)價(jià)及體外抗SARS-CoV藥物研究.pdf

1、　　目的：評(píng)價(jià)SARS-CoV實(shí)驗(yàn)滅活疫苗在小動(dòng)物(兔)體內(nèi)的免疫效力和安全性,制備高效價(jià)兔抗SARS-CoV血清,以及尋找有效的抗SARS-CoV藥物。
　　方法：將滅活SARS-CoV全病毒配伍弗氏佐劑免疫SPF級(jí)新西蘭兔。免疫后,每隔一周耳靜脈取血,分離血清,間接ELISA法檢測(cè)血清中特異性IgG抗體,病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)血清中和抗體,蛋白芯片檢測(cè)SARS-CoV不同重組蛋白抗原(S1、S2、S3、S4、N、M、3CL)結(jié)合抗血

2、清能力；HE染色檢測(cè)免疫后兔部分組織的病理變化；辛酸-硫酸銨鹽析及DEAE離子交換層析分離、純化兔抗血清。與此同時(shí),開展植物藥體外抗病毒活性篩選。
　　結(jié)果：SARS-CoV實(shí)驗(yàn)滅活疫苗免疫后,兔體內(nèi)能快速產(chǎn)生特異性IgG抗體和中和抗體,且產(chǎn)生的抗體能在體內(nèi)維持較長(zhǎng)時(shí)間；抗體水平呈現(xiàn)規(guī)律性變化,IgG抗體效價(jià)和中和抗體效價(jià)最高分別可達(dá)1：25600和1：2560以上。但是全病毒不同蛋白抗原引起的抗體水平有所差別,S2蛋白最強(qiáng)。免疫

3、后,兔肺組織出現(xiàn)病毒間質(zhì)性肺炎病理變化,與SARS患者肺部病理變化相似,其它組織沒有明顯的病理變化。兔抗血清經(jīng)分離、純化后,得到純度達(dá)90%以上的特異性IgG抗體,活性損失較少。體外抗病毒活性篩選出千金藤素和美國(guó)葡萄柚種子提取物都具有良好的抗SARS冠狀病毒活性,其治療作用的IC50分別為6.00μg/mL和1：50000。
　　結(jié)論：血清學(xué)試驗(yàn)和病理學(xué)試驗(yàn)為SARS滅活疫苗進(jìn)入靈長(zhǎng)類動(dòng)物及臨床試驗(yàn)提供技術(shù)支持并儲(chǔ)備物質(zhì)基礎(chǔ)；體外