SARS-CoV蛋白質(zhì)的抗體譜及雙抗原夾心ELISA檢測(cè)抗體方法的研究.pdf

1、嚴(yán)重急性呼吸綜合征(SARS)在全球范圍內(nèi)對(duì)公共衛(wèi)生和經(jīng)濟(jì)建設(shè)構(gòu)成了嚴(yán)重威脅，其病原體為SARS冠狀病毒(SARS-CoV)。了解人體對(duì)該病毒各種蛋白質(zhì)的特異性抗體譜有助于發(fā)展基因工程疫苗和診斷方法。在本研究中，我們研究了人體內(nèi)SARS-CoV蛋白質(zhì)的抗體譜，探討了主要抗體的中和活性，并建立和評(píng)價(jià)了一個(gè)檢測(cè)SARS-CoV抗體的基于重組N蛋白的雙抗原夾心ELISA方法。 1.SARS-CoV蛋白質(zhì)的抗體譜及抗體中和活性

2、在大腸桿菌中克隆、表達(dá)了涉及SARS-CoV4種結(jié)構(gòu)蛋白(S、E、M和N)和5種預(yù)測(cè)未鑒定蛋白(3a、3b、6、7a和9b)的13種重組蛋白質(zhì)，將它們純化后點(diǎn)在醛基化玻片上制備蛋白質(zhì)芯片，用于篩查SARS患者血清中的特異性抗體、監(jiān)測(cè)SARS患者不同病程血清中抗體的變化規(guī)律。結(jié)果在恢復(fù)期SARS患者血清中檢出了針對(duì)蛋白S、3a、N、9b的抗體，但未檢出針對(duì)蛋白E、M、3b、6和7a的抗體。在可檢出的4種抗體中以抗N和抗S為主，它們可在SA

3、RS患者血清中一直持續(xù)到30周以上，第30周時(shí)的平均熒光強(qiáng)度約為第4周時(shí)的一半。此外，在用重組蛋白S3(aa241～591)、N(全長(zhǎng))、3a(aa125～274)和9b(全長(zhǎng))免疫兔所制備的抗血清中，只有抗S3的多克隆抗體對(duì)SARS-CoV感染VeroE6細(xì)胞具有中和活性，中和抗體滴度為1：708。結(jié)果顯示，抗N和抗S抗體可作為SARS-CoV感染的診斷指標(biāo)，細(xì)菌表達(dá)的蛋白S3和N可作為候選診斷抗原，S3還可作為發(fā)展亞單位疫苗的潛在候

4、選蛋白；血清學(xué)證據(jù)提示SARS-CoV可能含有2種獨(dú)特的未鑒定蛋白3a和9b。 2.雙抗原夾心ELISA檢測(cè)SARS-CoV抗體 在SARS-CoVN蛋白不同區(qū)域抗原性分析的基礎(chǔ)上，利用蛋白質(zhì)芯片分析技術(shù)所篩選出的重組N蛋白，建立雙抗原夾心ELISA方法。用N蛋白片段N13(aa221～422)作包被抗原時(shí)特異性高于用全長(zhǎng)N蛋白，基于N13的雙抗原夾心ELISA敏感性和特異性均高于基于全病毒裂解液的間接ELISA。用新建