Melatonin對巨核細胞凋亡的影響及對鐵負荷過重損害的保護作用研究.pdf

1、目的：探討Mel對巨核細胞凋亡的影響及其作用機制，并探討鐵負荷過重是否對巨核細胞有凋亡損害作用以及Mel是否具有抑制凋亡的保護作用。 方法：采用巨核細胞細胞株CHRF-288-11為研究對象。(1)通過去血清誘導凋亡，加或不加Mel共培養(yǎng)后，①進行24、48、72小時細胞計數(shù)、臺盼蘭拒染法測細胞存活率及XTT法檢測細胞增殖情況；②用流式細胞儀分別以Annexin V、Caspase-3、JC-1三種方法測定各組細胞凋亡率；并與正

2、常組和TPO組比較；⑧檢測信號通路AKT、ERK1/2，了解其參與保護作用的機制。(2)通過臺盼蘭拒染法測活細胞比率和流式細胞儀法測定Annexin V、Caspase-3、JC-1，觀察FeCl3負荷過重對CHRF細胞的凋亡損害作用。(3)通過臺盼蘭拒染法測活細胞比率和流式細胞儀法測定Annexin V、Caspase-3、JC-1，觀察Mel是否能夠抑制鐵負荷過重導致的細胞凋亡。 結果：(1)Mel對巨核系細胞CHRF增殖和

3、凋亡的影響：①細胞計數(shù)：在觀察周期內(nèi)，隨著孵育時間的延長，正常培養(yǎng)組細胞增殖明顯，對照組細胞數(shù)量則明顯減少，48h、72h分別為(3.3±0.7)×105/mL、(4.4±0.4)×105/mL，僅為同期正常組細胞數(shù)的62.3％(P=0.001)和37.9％(P=0.000)，差異有統(tǒng)計學意義。加入濃度為20、50、100、200和500 nmol/L Mel后，在濃度＞50 nmol/L Mel組細胞數(shù)量較對照組有明顯增加，差異有統(tǒng)計

4、學意義。細胞存活率顯示，在濃度50 nmol/L以上Mel組細胞存活率明顯提高，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義。其中，濃度200nmol/L時保護作用最強，細胞存活率由(66.8±3.8)％升至(81.6±5.2)％(n=4，P＜0.001)。XTT法檢測細胞增殖情況顯示：Mel在濃度＞100nmol/L作用48、72小時后，OD值較對照組明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。②抗凋亡作用：Mel 200 nmol/L作用72小時

5、后，CHRF細胞Annexin V/PI、Caspase-3和JC-1的表達較對照組有明顯下降，分別由(42.9±5.8)％、(29.5±5.6)％、(47.7±3.4)％降至(31.7±6.8)％(P＜0.05)、(21.8±1.7)％(P＜0.05)和(37.2±6.4)％(P＜0.05)。其中，JC-1的表達與TPO組(20.7+5.2)％比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，而Annexin V/PI、Caspase-3的表達

6、與TPO組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。③加入Mel后CHRF細胞的磷酸化AKT、ERK1/2水平明顯增高，分別由(5.9±0.1)％、(6.1±0.4)％升至(9.5±0.1)％(P＜0.05)、(9.3 ±0.5)％(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計學意義。(2)鐵對CHRF細胞凋亡的影響：濃度0.3mmol/L FeCl3作用8小時后，CHRF細胞存活率下降，凋亡明顯，Annexin V/PI、Caspase-3和JC-1的表

7、達與對照組比較，分別為(37.9±2.7)％vs(16.4±2.8)％、(26.5±4.5)％vs(6.4±1.5)％和(35.7±5.6)％vs(10.8±3.1)％，差異有統(tǒng)計學意義。(3)Mel 200nmol/L可以拮抗鐵毒性，減少細胞凋亡，Annexin V/PI、Caspase-3和JC-1的表達，分別由(37.9±2.7)％、(26.5±4.5）％、(35.7±5.6)％降為(26.9±2.2)％、(19.0±3.9)％、