吸煙對(duì)氣道平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡的影響及HSP70在凋亡中保護(hù)作用的研究.pdf

1、本研究探討香煙提取物對(duì)氣道平滑肌細(xì)胞細(xì)胞增殖中ERKs及NF-κB的影響。
　　 方法：
　　 體外培養(yǎng)Wistar大鼠的氣道平滑肌細(xì)胞，給予不同濃度的香煙提取物刺激24小時(shí)后，MTT法檢測(cè)增殖情況，采用Western blot的方法檢測(cè)細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶以及磷酸化的細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶和核因子-κB的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.在不同濃度香煙提取物對(duì)氣道平滑肌細(xì)胞刺激后，氣道平滑肌細(xì)胞的A值

2、分別為0.247±0.027(對(duì)照組)、0.298±0.038(1/32CSE組)、0.353±0.017(1/16CSE組)和0.376±0.024(1/8CSE組)。隨CSE濃度的增高細(xì)胞增殖程度逐漸增加，與對(duì)照組比較均有顯著性增高。
　　 2.在不同濃度香煙提取物對(duì)氣道平滑肌細(xì)胞刺激后經(jīng)過(guò)對(duì)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析后顯示，ERKs、 p-ERK、NF-κB的表達(dá)均隨CSE濃度的增高而逐漸增高，且與對(duì)照組相比有顯著性差異。
　　

3、 3.將對(duì)照組及不同濃度的CSE組中氣道平滑肌細(xì)胞p-ERK和NF-κB免疫印跡的表達(dá)的A值與相應(yīng)β-actin的A值比較后所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)NF-κB的表達(dá)水平隨p-ERK的表達(dá)的增加呈增加趨勢(shì)。
　　 結(jié)論：
　　 一定濃度的CSE作用氣道平滑肌細(xì)胞后可引起其增殖，而且隨CSE濃度的增高細(xì)胞增殖程度逐漸增加；同時(shí)ERKs、p-ERK 及NF-κB的表達(dá)增加，磷酸化激活后的ERKs可能通過(guò)NF-κB的活化

4、參與氣道平滑肌細(xì)胞的增殖。吸煙是引起慢性阻塞性肺疾病(COPD)的最重要的環(huán)境危險(xiǎn)因素。
　　 本研究通過(guò)建立吸煙大鼠COPD模型來(lái)探討PI-3K在COPD氣道平滑肌增生中的作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 制作大鼠吸入香煙煙霧后的COPD模型，測(cè)定大鼠氣道阻力及呼吸系統(tǒng)總順應(yīng)性，對(duì)氣道平滑肌進(jìn)行HE染色及PCNA免疫組化觀察，并且逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)氣道平滑肌中PI-3KmRNA表達(dá)。
　

5、　 結(jié)果：
　　 1.呼吸功能檢測(cè) 兩組的呼吸功能檢測(cè)顯示：在氣道阻力方面CODP組和對(duì)照組兩者相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 2.肺組織的HE染色在吸煙4月組，見(jiàn)大鼠支氣管氣道平滑肌增厚，部分肺泡壁變薄、斷裂、肺泡融合、肺泡腔擴(kuò)大以及炎癥細(xì)胞侵潤(rùn)；而對(duì)照組的支氣管及肺組織結(jié)構(gòu)正常。
　　 3.氣道平滑肌PCNA的表達(dá) 平滑肌細(xì)胞核棕黃色為提示PCNA陽(yáng)性。
　　 4.COPD大鼠組和對(duì)照組PI-3K

6、mRNA的表達(dá) 將PI-3KmRNA的A值與β-actinA值比較后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩者相比有顯著性差異。
　　 5.將對(duì)照組及COPD大鼠組中氣道平滑肌中PI-3KmRNA表達(dá)的A值與相應(yīng)β-actin的A值比較后所得的值和PCNA表達(dá)的值進(jìn)行相關(guān)分析后發(fā)現(xiàn)，PI-3KmRNA的表達(dá)水平與PCNA的表達(dá)水平的呈明顯正相關(guān)。
　　 結(jié)論：
　　 香煙煙霧可能通過(guò)PI-3K信號(hào)途徑在COPD大鼠氣道平滑肌增生中發(fā)揮作用

7、。吸煙是引起慢性阻塞性肺疾病發(fā)生的主要危險(xiǎn)因素。較高濃度的香煙提取物刺激氣道平滑肌細(xì)胞后可導(dǎo)致其凋亡。凋亡程序牽涉到幾個(gè)主要的執(zhí)行者，應(yīng)激活化蛋白激酶是其中之一。JNK是絲裂原激活蛋白激酶家族重要成員之一，它在氣道平滑肌細(xì)胞中也有表達(dá)。JNK信號(hào)途徑的活化可激活下游的細(xì)胞凋亡信號(hào)通路。較低濃度的香煙提取物刺激氣道平滑肌細(xì)胞后，可以引起氣道平滑肌細(xì)胞HSP70表達(dá)的增加，而增加表達(dá)的HSP70 能對(duì)細(xì)胞起保護(hù)作用。
　　 本研究探

8、討施維舒對(duì)氣道平滑肌細(xì)胞中的熱休克蛋白70表達(dá)的影響。
　　 方法：
　　 將體外培養(yǎng)Wistar大鼠的氣道平滑肌細(xì)胞進(jìn)行分組。用 Western blot的方法檢測(cè)氣道平滑肌細(xì)胞中HSP70的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 各組氣道平滑肌細(xì)胞HSP70的表達(dá)免疫印跡的表達(dá)。
　　 結(jié)論：
　　 一定濃度的GGA能誘導(dǎo)氣道平滑肌細(xì)胞HSP70表達(dá)的增加，而且隨GGA濃度增高而增加。吸煙是引

9、起慢性阻塞性肺疾病發(fā)生的主要危險(xiǎn)因素。較高濃度香煙提取物的刺激可導(dǎo)致氣道平滑肌細(xì)胞的凋亡。
　　 通過(guò)給予不同濃度的香煙提取物刺激氣道平滑肌細(xì)胞后，觀察香煙提取物對(duì)氣道平滑肌細(xì)胞凋亡中p-JNK的表達(dá)的影響。
　　 方法：
　　 將體外培養(yǎng)Wistar大鼠的氣道平滑肌細(xì)胞分組。給予不同濃度的香煙提取物刺激3小時(shí)后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡細(xì)胞的發(fā)生率法；用Western blot的方法檢測(cè)氣道平滑肌細(xì)胞中p-JNK的表

10、達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.給予不同濃度的香煙提取物刺激后，與對(duì)照組相比，不同濃度的香煙提取物組的凋亡均顯著的升高，而且隨香煙提取物濃度的增加升高越明顯。
　　 2.加入不同濃度的香煙提取物處理的氣道平滑肌細(xì)胞后p-JNK的表達(dá)結(jié)果：不同濃度的香煙提取物處理組的p-JNK的表達(dá)均顯著的升高，而且隨香煙提取物濃度的增加升高越明顯。
　　 結(jié)論：
　　 通過(guò)我們的研究表明較高濃度的香煙提取物作用氣道

11、平滑肌細(xì)胞后引起氣道平滑肌細(xì)胞的的凋亡增加，而且香煙提取物濃度越高氣道平滑肌細(xì)胞的凋亡率越高；同時(shí)，氣道平滑肌細(xì)胞中p-JNK表達(dá)的增加，而且其表達(dá)也隨著香煙提取物濃度的增高而增加。較高濃度的香煙提取物作用氣道平滑肌細(xì)胞后可能通過(guò)JNK的活化啟動(dòng)細(xì)胞凋亡程序?qū)е录?xì)胞凋亡。
　　 附屬部分：吸煙對(duì)肺功能及外周血T淋巴細(xì)胞IL-2mRNA的影響
　　 吸煙是慢性阻塞性肺疾病(COPD)發(fā)生的危險(xiǎn)因素[1]。大量的研究表明，在

12、COPD患者的氣道、肺實(shí)質(zhì)和肺血管中均存在著慢性炎癥，并且影響肺功能。T淋巴細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子等參與吸煙引起的炎癥過(guò)程。白介素-2(IL-2)是一種有效的T淋巴因子，IL-2在淋巴細(xì)胞發(fā)育、淋巴細(xì)胞激活和維持免疫反應(yīng)中都發(fā)揮著重要的作用。目前，吸煙對(duì)肺功能及外周血T淋巴細(xì)胞中IL-2mRNA表達(dá)的影響尚不清楚。本研究通過(guò)檢測(cè)吸煙者外周血T淋巴細(xì)胞IL-2mRNA表達(dá)的變化，以及吸煙對(duì)肺功能的影響，探討吸煙在COPD發(fā)病中的作用。

13、r>　　 方法：
　　 隨機(jī)選擇健康吸煙者和非吸煙者各24名，檢測(cè)肺功能指標(biāo)、檢測(cè)外周血T淋巴細(xì)胞中IL-2mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 吸煙組中FEV1、FEV1/ FVC[％]、MMEF75/25較對(duì)照組有明顯下降(P<0.05，n=24)；吸煙組中IL-2mRNA較對(duì)照組有顯著性增高(P＜0.05，n=24)。肺功能中FEV1隨IL-2mRNA的表達(dá)水平增加呈降低趨勢(shì)，其r=-0.758(P＜0.0