Toll樣受體2和4增強(qiáng)IFN-α抗病毒效應(yīng)機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：探討Toll樣受體2和4(TLR2和TLR4)在α-干擾素(IFN-α)抗病毒效應(yīng)中的作用以及抗病毒蛋白2',5'-OAS和PKR在體外對(duì)抗HBV活性的研究。
　　方法：以人肝胚瘤細(xì)胞HepG2為細(xì)胞模型,通過LPS刺激并聯(lián)合IFN-α處理細(xì)胞,以RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞表面TLR2和TLR4的表達(dá),再以Western blot和RT-PCR檢測(cè)HepG2細(xì)胞中IFN-αJAK-STAT途徑分子STAT1、STAT2和IRF9

2、的表達(dá),進(jìn)一步分析IFN-α誘導(dǎo)的MxA、2',5'-OAS、PKR等抗病毒蛋白的表達(dá)。
　　以穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HBV全基因組,并能分泌完整HBV病毒顆粒子的肝胚瘤細(xì)胞株HepG2.2.15細(xì)胞為細(xì)胞模型,將未處理的HepG2.2.15細(xì)胞作為空白組;將轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pEGFP-2',5'-OAS的HepG2.2.15細(xì)胞作為2',5'-OAS組;將轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pEGFP-PKR的HepG2.2.15細(xì)胞作為PKR組;將同時(shí)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pEGFP-2'

3、,5'-OAS和pEGFP-PKR的HepG2.2.15細(xì)胞的作為共轉(zhuǎn)染組。Western blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)PKR和2',5'-OAS蛋白的表達(dá),電化學(xué)發(fā)光方法檢測(cè)HepG2.2.15細(xì)胞分泌的HBsAg和HBeAg量;熒光定量PCR法檢測(cè)上清液中HBV DNA的量。
　　結(jié)果：研究表明,HepG2細(xì)胞在LPS的刺激下,細(xì)胞表面TLR2、TLR4 mRNA的表達(dá)水平升高(P<0.05),而STAT1、STAT2、IRF9等相關(guān)信

4、號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的表達(dá)卻無顯著變化;與IFN-α單獨(dú)處理相比,LPS和IFN-α聯(lián)合處理HepG2細(xì)胞,可使細(xì)胞內(nèi)JAK-STAT途徑信號(hào)分子STAT1、STAT2、IRF9及抗病毒蛋白2',5'-OAS、PKR表達(dá)增加(P<0.05),而抗病毒蛋白MxA的表達(dá)水平無顯著變化(P>0.05)。
　　HepG2.2.15細(xì)胞經(jīng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染能夠表達(dá)2',5'-OAS、PKR蛋白,且2',5'-OAS組和PKR組細(xì)胞上清液中HBsAg和HBeAg

5、的量低于空白對(duì)照組(P<0.05)。共轉(zhuǎn)染組上清液中HBsAg和HBeAg的量明顯低于空白對(duì)照組(P<0.01);不過,各組上清液中HBV DNA的表達(dá)無顯著性差異。
　　結(jié)論：(1)HepG2細(xì)胞表面TLR2、TLR4被LPS刺激表達(dá)后,可影響細(xì)胞內(nèi)IFN-αJAK-STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,提高抗病毒蛋白PKR和2',5'-OAS的表達(dá),從而增強(qiáng)了IFN-α的抗病毒效應(yīng)。(2)在體外,抗病毒蛋白PKR和2',5'-OAS具有獨(dú)立的