重組人IFN-λ1基因在大腸桿菌中的表達(dá)及其對(duì)角膜基質(zhì)細(xì)胞的抗病毒作用研究.pdf

1、目的：獲取重組人IFN-λ1(rhIFN-λ1)的原核表達(dá)產(chǎn)物并測(cè)定其效價(jià)，研究rhIFN-λ1對(duì)兔角膜基質(zhì)細(xì)胞的抗單純皰疹病毒(HSV)作用。 方法：用本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的含基因重組表達(dá)載體pGEX-4T-λ1的大腸桿菌BL21，經(jīng)ITPG誘導(dǎo)表達(dá)和包涵體提取純化后獲取rhFN-λ1蛋白，采用微量滴定法測(cè)定其效價(jià)。采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)兔眼角膜基質(zhì)細(xì)胞，用微量細(xì)胞病變法比較rhIFN-λ1、IFN-α標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)兔眼角膜基質(zhì)細(xì)胞的抗單純皰

2、疹病毒作用。 結(jié)果：誘導(dǎo)含基因重組表達(dá)載體PGEX-4T-λ1的大腸桿菌BL21后，采用12％SDS-PAGE蛋白電泳顯示出一條相對(duì)分子量約為33kDa的蛋白條帶；采用微量滴定法測(cè)定其效價(jià)，用IFN-α標(biāo)準(zhǔn)品校正其效價(jià)為62.5 IU/ml。125/2、125/4、125/8 IU/ml的IFN-α標(biāo)準(zhǔn)品、rhIFN-λ1均分別可抗32、16、8TCID<,50>HSV-I的感染。125/2、125/4、125/8 IU/ml的

3、IFN-α標(biāo)準(zhǔn)品分別可抗16、8、4TCID<,50>HSV-Ⅱ的感染；125/2、125/4、125/8 IU/ml的rhIFN-λ1分別可對(duì)抗8、4、2TCID<,50>HSV-Ⅱ的感染。 結(jié)論：含基因重組表達(dá)載體pGEX-4T-λ1的大腸桿菌BL21，經(jīng)ITPG誘導(dǎo)表達(dá)和包涵體提取純化后可獲得rhIFN-λ1，它對(duì)兔眼角膜基質(zhì)細(xì)胞有一定的抗單純皰疹病毒作用。rhIFN-λ1抗HSV-I的作用與IFN-α相近；rhIFN-λ