連翹提取物（單體及單體最佳配比）對(duì)膿毒癥大鼠的療效評(píng)價(jià).pdf

1、目的:
　　觀察連翹提取物（單體）對(duì)膿毒癥大鼠術(shù)后48h、72h及1周存活率的影響，初步篩選出最有效的前3種單體;引用單味中藥有效單體（組效-量效）配伍的理念，運(yùn)用正交設(shè)計(jì)的研究方法，得出最佳組份及配比;觀察最佳配比對(duì)膿毒癥大鼠血清內(nèi)毒素、腫瘤壞死因子-α、白介素1、白介素6等炎癥介質(zhì)的影響及對(duì)凝血機(jī)制、肝腎功能等方面的影響。
　　方法:
　　(1)采用大鼠盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)模型，術(shù)前12h禁食，不禁水，5％水合氯

2、醛麻醉(350-400mg/kg)腹腔麻醉，麻醉滿意后，前腹正中備皮，消毒腹部皮膚，于腹部正中做2.5cm切口，取出盲腸后，游離腸系膜和盲腸，距盲、回腸結(jié)合部約盲腸全長(zhǎng)1/3處，4號(hào)手術(shù)縫線盡量回避血管結(jié)扎，于距結(jié)扎處遠(yuǎn)端約0.8-1cm處回避血管，三棱針(2.6×65mm)貫穿孔，3×30mm膠條貫穿盲腸留滯，放回腹腔，縫合切口。術(shù)后頸部皮下補(bǔ)液10mL，補(bǔ)充術(shù)中液體流失，抗休克;(2)分三個(gè)梯度（20％乙醇、50％乙醇、80％乙醇）

3、分別對(duì)連翹進(jìn)行提取，得到三種對(duì)應(yīng)的連翹粗提取物后，分別予大鼠給藥，觀測(cè)大鼠48h、72h及1周的存活情況，選擇對(duì)膿毒癥大鼠最有效的連翹粗提取物，并以此實(shí)驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)，對(duì)有效的連翹粗提取物進(jìn)行進(jìn)一步的單體提取，提純連翹提取物混合成份中含量最多的4種成份，用連翹提取物混合成分中含量最多的4中成份分別進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，通過尾靜脈注射給藥的方法，觀察各單體對(duì)膿毒癥大鼠48h及72h的死亡率及生存時(shí)間的影響，初步篩選出對(duì)治療膿毒癥大鼠有效的單體;（3

4、)對(duì)篩選出治療膿毒癥大鼠有效的單體，通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，運(yùn)用正交設(shè)計(jì)，得出對(duì)膿毒癥大鼠有治療作用的3種單體的（組效-量效）關(guān)系，尋找最佳配比;(4)采用化學(xué)鑒別、核磁共振氫譜(1H-NMR)、核磁共振碳譜（13C-NMR）、薄層色譜(TLC)、高效液相色譜(HPLC)等光譜色譜方法對(duì)所分離出的四個(gè)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，確定化合物的結(jié)構(gòu)和名稱（主要由天津藥物研究院完成）;(5)通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，運(yùn)用酶聯(lián)免疫法及檢驗(yàn)，研究連翹有效單體最佳配比對(duì)膿毒癥大

5、鼠術(shù)后24h、48h、72小時(shí)TNF-α、IL-1β、LPS、IL-6，血常規(guī)，肝腎功能，凝血機(jī)制的影響。
　　結(jié)果:
　　(1)50％連翹粗提取物對(duì)膿毒癥有很好的治療作用，能夠在一定程度上降低膿毒癥大鼠的死亡率，并相對(duì)延長(zhǎng)膿毒癥大鼠的生存時(shí)間;(2)記錄9種不同產(chǎn)地連翹的指紋圖譜;(3)分離出的四種化合物由鑒定可得出，一個(gè)木脂素類（連翹苷）、一個(gè)苯乙醇苷類（連翹酯苷A）、兩個(gè)黃酮類（蘆丁和槲皮素），連翹苷、連翹酯苷A及槲皮

6、素均能降低膿毒癥大鼠術(shù)后48h、72h及1周的死亡率，并相對(duì)延長(zhǎng)膿毒癥大鼠的生存時(shí)間;(4)單體連翹苷、連翹酯苷A及槲皮素在治療膿毒癥大鼠模型中的最佳配比為2∶3∶3;(5)在膿毒癥病程的早期，連翹提取物能夠拮抗機(jī)體炎癥介質(zhì)釋放，活白細(xì)胞及凝血系統(tǒng)來阻止病原微生物（如細(xì)菌）的進(jìn)一步擴(kuò)散。
　　結(jié)論:
　　(1)50％連翹粗提取物對(duì)膿毒癥大鼠有一定的治療作用，能夠在一定程度上降低膿毒癥大鼠的死亡率，并相對(duì)延長(zhǎng)膿毒癥大鼠的生存時(shí)