連翹提取物的免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤作用的研究.pdf

1、目的： 1．研究連翹水提物體外對(duì)小鼠S180腫瘤細(xì)胞的抑制作用并對(duì)其活性部位進(jìn)行初步篩選； 2．研究連翹水提物體外對(duì)小鼠脾細(xì)胞的增殖抑制作用并對(duì)其免疫調(diào)節(jié)作用的活性部位進(jìn)行初步篩選； 3．研究連翹水提物活性部位的免疫調(diào)節(jié)作用。 方法： 1．采用小鼠S180腫瘤細(xì)胞和脾細(xì)胞體外增殖模型對(duì)連翹水提物的抗腫瘤活性部位及其免疫活性有效部位進(jìn)行初步篩選： （1）取連翹原藥材（生藥）加12倍蒸餾水煎煮

2、1．5h，連續(xù)3次，合并煎煮液，減壓濃縮，得連翹水提物（FSE）。 （2）取連翹水提物，依次用石油醚、乙醚、乙酸乙酯等進(jìn)行萃取，剩余部位用80％乙醇醇沉。分別得到石油醚部位（FSⅠ），乙醚部位（FSⅡ），乙酸乙酯部位（FSⅢ），乙醇溶解部位（FSⅣa）和乙醇沉淀部位（FSⅣb）。 （3）采用MTT法，觀察連翹水提物及其上述化學(xué)部位對(duì)S180腫瘤細(xì)胞和脾細(xì)胞體外增殖的影響，對(duì)其有效部位進(jìn)行初步篩選。 2．采用體外和

3、體內(nèi)多種實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛯?duì)連翹提取物活性部位的免疫調(diào)節(jié)作用進(jìn)行研究：ConA誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞增殖反應(yīng)檢測(cè)對(duì)T細(xì)胞增殖功能的影響、LPS誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞增殖反應(yīng)檢測(cè)對(duì)B細(xì)胞增殖功能的影響、MTT法檢測(cè)對(duì)腹腔滲出細(xì)胞代謝活力的影響、ELISA方法檢測(cè)對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF-α的影響、ELISA方法檢測(cè)對(duì)小鼠脾細(xì)胞分泌INF-γ和分泌IL-2的影響、雞紅細(xì)胞法檢測(cè)對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞（MФ）體內(nèi)吞噬功能的影響、有限稀釋微量溶血法檢測(cè)對(duì)小鼠血清溶血

4、素水平的影響、耳廓腫脹法檢測(cè)對(duì)小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響等。 結(jié)果： 1．連翹水提取物以及其乙醇溶解部位（FSⅣa）對(duì)小鼠S180腫瘤細(xì)胞的體外增殖有顯著的抑制作用，與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組比較差異具有顯著性（P<0．05）。其余化學(xué)部位對(duì)小鼠S180腫瘤細(xì)胞的體外增殖沒有顯著的抑制作用。 2．連翹水提物以及其乙醇溶解部位（FSⅣa）對(duì)小鼠脾細(xì)胞增殖的體外增殖有較強(qiáng)的抑制作用，與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組比較差異具有顯著性（P<0．05），其

5、乙醇沉淀部位（FSⅣb）在高濃度時(shí)（8mg·mL-1）也有顯著的抑制，與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組比較差異具有顯著性（P=0．008）．其余化學(xué)部位對(duì)小鼠脾細(xì)胞的體外增殖沒有顯著的抑制作用。 3．實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，連翹水提取物的乙醇溶解部位（FSⅣa）對(duì)Con A誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞增殖、LPS誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖、腹腔滲出細(xì)胞代謝MTT活力、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF-α、小鼠脾細(xì)胞分泌INF-γ、小鼠脾細(xì)胞分泌IL-2、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞（MФ）體內(nèi)吞噬