HBV編碼蛋白調(diào)節(jié)炎性體激活途徑的實驗研究.pdf

1、慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是世界上一個重要的健康難題，世界衛(wèi)生組織(WHO)的數(shù)據(jù)顯示，全世界有超過3億人的慢性HBV感染者，值得注意的是，慢性HBV感染可引起肝硬化和肝細(xì)胞癌(HCC)。目前有關(guān)慢性HBV感染的發(fā)生機(jī)制尚不清楚，推測與病毒的變異、病毒載量以及機(jī)體免疫狀態(tài)密切相關(guān)。機(jī)體的抗病毒免疫應(yīng)答包括固有免疫和適應(yīng)性免疫，近年來固有免疫的研究取得了很大的進(jìn)展，最近研究發(fā)現(xiàn)以固有免疫受體如NLR為主的炎性體在抗病毒感染及其炎癥反應(yīng)

2、中起著重要的作用，炎性體是由NLR、ASC和半胱天冬氨酸酶組成的大分子復(fù)合物，炎性體能夠激活半胱天冬氨酸酶，活化的半胱天冬氨酸酶能夠酶切IL-1β和IL-18前體分子而生成具有生物學(xué)活性的IL-1β和IL-18，參與炎癥反應(yīng)等生物學(xué)效應(yīng)。
　　 近年來有關(guān)炎性體在疾病中作用的研究取得很大進(jìn)展，研究表明炎性體與慢性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病密切相關(guān)，與肝臟缺血再灌注、肝纖維化、酒精性肝病、病毒性肝炎等肝臟疾病發(fā)生相關(guān)，

3、如最近的研究表明，HCV在感染人類肝臟細(xì)胞后通過活化炎性體NLRP3復(fù)合物促進(jìn)炎癥因子IL-18的成熟和分泌，HCV感染外周血單個細(xì)胞(PBMC)后也可以上調(diào)IL-18的產(chǎn)生，可能與肝損傷有關(guān)。乙型肝炎病毒(HBV)能促進(jìn)患者體內(nèi)IL-1β上調(diào)，所引起的慢性肝臟疾病也與IL-1β有密切關(guān)系，但還不清楚其分子機(jī)制。
　　 為研究HBV與固有免疫應(yīng)答尤其是炎性體的活化途徑的相互作用及其分子機(jī)制，本研究通過觀察HBV編碼蛋白HBcAg

4、和HBxAg對人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞株THP-1細(xì)胞的炎性體活化途徑的調(diào)節(jié)作用及其分子機(jī)制，研究HBV與炎性體的相互作用，為闡明HBV慢性化的機(jī)制奠定一定理論基礎(chǔ)，為慢性HBV的防治提供新的策略。
　　 方法:將編碼HBcAg和HBxAg基因的真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染THP-1細(xì)胞，用LPS和Poly(dA-dT)等刺激THP-1細(xì)胞，采用熒光定量PCR技術(shù)檢測炎性體相關(guān)分子，如NLRP1、NLRP3、AIM2、IFI16、NLRC4

5、、caspase-1、ASC和IL-1β在mRNA水平的表達(dá)情況，同時以ELISA技術(shù)和蛋白印跡技術(shù)檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)和分泌，并采用RNA干擾技術(shù)研究HBcAg的分子調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　 結(jié)果表明:1:HBcAg促進(jìn)Poly(dA-dT)刺激的炎性體活化途徑，而對ATP/Nigericin刺激的炎性體活化途徑?jīng)]有影響，同時HBcAg促進(jìn)炎性體相關(guān)分子的表達(dá)，其中對AIM2 mRNA表達(dá)促進(jìn)作用比較明顯。使用RNA干擾抑制AIM2表達(dá)