慢性乙肝患者抗病毒治療與停藥復(fù)發(fā)后體內(nèi)HBV特異性T細(xì)胞的研究.pdf

1、目的：
　　研究免疫耐受期、抗病毒治療和停藥復(fù)發(fā)的慢性乙型病毒性肝炎患者外周血中HBV特異性CD8+T細(xì)胞的水平及免疫功能，探討停藥復(fù)發(fā)患者短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)嚴(yán)重肝損害的可能原因。
　　方法：
　　1.研究對(duì)象
　　收集2014年5月至2014年12月就診于南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院傳染科的CHB患者111例，經(jīng)HLA-A2組織分型得到HLA-A2+49例，分成三組：免疫耐受組15例，男11例，女4例，平均28.8±8.3歲

2、，均為免疫耐受期患者（即ALT正常、HBeAg陽性、HBV-DNA持續(xù)高水平、肝組織沒有或僅有輕微炎癥）；抗病毒治療組20例，男14例，女6例，平均41.0±14.3歲，為經(jīng)過抗病毒治療后HBV-DNA持續(xù)陰性6個(gè)月以上；停藥復(fù)發(fā)組14例，男10例，女4例，平均44.9±11.2歲，為經(jīng)過核苷（酸）類似物抗病毒治療HBV-DNA轉(zhuǎn)陰至少6個(gè)月以上而停藥復(fù)發(fā)者。所有患者均符合2010年版《慢性乙型肝炎防治指南》中確定的診斷標(biāo)準(zhǔn)；均排外合并

3、藥物、毒物、酒精、其他病毒、遺傳代謝性疾病等所致肝損者。收集健康者25例，經(jīng)分型得到HLA-A2+者8例，男5例，女3例，平均年齡35.9±9.2歲，作為陰性對(duì)照組；排除HAV、HBV、HCV、HDV、HEV及HIV等感染。
　　2.實(shí)驗(yàn)方法
　　收集受試者HBV-DNA、HBeAg、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）等臨床指標(biāo)。HBV-DNA的檢測(cè)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法，血清HBeAg采用雅培Axsym全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢

4、測(cè)，ALT采用日立7600型全自動(dòng)生化分析檢測(cè)；采用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行HLA-A2分型；采用MHC-五聚體流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HLA-A2陽性患者HBcAg18-27特異性CD8+T細(xì)胞的數(shù)量；分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），采用ELISPOT檢測(cè)HBV特異性CTL分泌IFN-γ、TNF-α等細(xì)胞因子功能。分析各組特異性 T細(xì)胞數(shù)量及分泌功能之間的差異，及它們與HBV-DNA、HBeAg之間的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　?。?）免疫耐受

5、組患者HBV特異性CD8+T細(xì)胞數(shù)量及免疫功能明顯低于抗病毒治療組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　?。?）在免疫耐受組患者，HBV特異性CD8+T細(xì)胞的數(shù)量與血清HBV-DNA滴度、HBeAg之間呈明顯的負(fù)相關(guān)（r=－0.882，P<0.001；r=－0.755，P=0.001），細(xì)胞因子分泌功能與HBV-DNA滴度、HBeAg之間也呈明顯負(fù)相關(guān)性（分泌IFN-γ：r=－0.837，P<0.001；r=－0.787，P<0

6、.001；分泌TNF-α：r=－0.685，P=0.005；r=－0.671，P=0.006）。
　　（3）在抗病毒治療組患者，HBV特異性CD8+T細(xì)胞的數(shù)量增多，且隨HBV-DNA陰轉(zhuǎn)時(shí)間延長、HBeAg水平的下降而增強(qiáng)，恢復(fù)峰值出現(xiàn)在HBV-DNA轉(zhuǎn)陰1年左右，之后隨陰轉(zhuǎn)時(shí)間延長而表現(xiàn)出降低趨勢(shì)，并維持在較低水平。
　?。?）停藥復(fù)發(fā)組患者HBV特異性CD8+T細(xì)胞數(shù)量及免疫功能均高于抗病毒治療組（P<0.05）和免疫

7、耐受組（P<0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?。?）三組患者HBV特異性CD8+T細(xì)胞的數(shù)量及免疫功能均高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　CHB患者HBV特異性CD8+T細(xì)胞的數(shù)量減少及免疫功能受損，可能與T細(xì)胞長期暴露在大量HBV抗原環(huán)境中導(dǎo)致T細(xì)胞耗竭有關(guān)；抗病毒治療能使HBV特異性T細(xì)胞的水平及功能得到恢復(fù)，但一味的抗病毒治療可能不利于機(jī)體特異性抗病毒免疫的維持；停藥復(fù)發(fā)患者短