自體尿源性干細(xì)胞結(jié)合3D多孔小腸粘膜下基質(zhì)用于兔尿道重建的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探索應(yīng)用自體兔尿源干細(xì)胞細(xì)胞（rabbit urine-derived stem cells，rUSCs）復(fù)合小腸黏膜下基質(zhì)（Small intestinal submucosa，SIS）構(gòu)建兔組織工程尿道的可行性，為臨床構(gòu)建組織工程尿道，用于尿道下裂殘疾、長(zhǎng)段尿道缺損等復(fù)雜、疑難情況尿道重建奠定基礎(chǔ)。
　　方法：收集24只雄性新西蘭大白兔尿液及膀胱沖洗液，分離、培養(yǎng)得到rUSC，檢測(cè)其自我更新及體外多向分化（平滑肌和上皮方

2、向）能力；用5%過(guò)氧乙酸（peracetic acid，PAA）處理SIS材料，對(duì)其微結(jié)構(gòu)、免疫原性、生物相容性進(jìn)行研究，并將PKH67標(biāo)記的rUSCs與SIS材料復(fù)合；隨機(jī)將24只雄性新西蘭大白兔分為兩組，并建立尿道缺損模型，缺損長(zhǎng)度約為2.0cm，對(duì)照組應(yīng)用單純5% PAA處理后的SIS材料修復(fù)（12只），實(shí)驗(yàn)組應(yīng)用5% PAA處理后并復(fù)合rUSCs的SIS材料修復(fù)（12只）。均于術(shù)后2周、3周、4周、12周行組織學(xué)和Western

3、 Blot檢測(cè)，12周行尿道造影。
　　結(jié)果：原代培養(yǎng)第4天即可在鏡下觀察到rUSC單克隆細(xì)胞，在第6天可形成克隆團(tuán)，在第11天出現(xiàn)細(xì)胞融合，形態(tài)成“米?！睜?，大小均一、排列緊湊；rUSCs經(jīng)體外誘導(dǎo)分化后，能高效的分化為平滑肌細(xì)胞和上皮細(xì)胞。經(jīng)5%PAA處理后，SIS材料表面變得疏松多孔，且DNA含量進(jìn)一步降低（P＜0.05）；組織學(xué)提示實(shí)驗(yàn)組平滑肌束再生在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均優(yōu)于對(duì)照組（P＜0.05），且更有序；上皮層數(shù)和新生血管數(shù)量

4、在早期（2、3、4周）好于對(duì)照組（P＜0.05），在晚期（12周）差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；對(duì)照組基質(zhì)出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和纖維化；尿道造影顯示實(shí)驗(yàn)組僅一只出現(xiàn)輕微尿道狹窄，而對(duì)照組三只均出現(xiàn)輕微尿道狹窄。免疫熒光顯示 rUSCs在體內(nèi)可轉(zhuǎn)化為平滑肌和上皮細(xì)胞。
　　結(jié)論：1）rUSCs能夠通過(guò)簡(jiǎn)單無(wú)創(chuàng)的方法獲取，具有良好的自我更新能力，體外易于培養(yǎng)和擴(kuò)增，并且具有分化成平滑肌細(xì)胞和上皮細(xì)胞的能力，是一種理想的組織工程種子細(xì)胞