天麻素對(duì)體外培養(yǎng)雪旺細(xì)胞增殖及其NGF表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過(guò)實(shí)驗(yàn)觀察天麻素(Gastrodin)對(duì)體外培養(yǎng)雪旺細(xì)胞(Schwann Cell,SCs)增殖及NGF表達(dá)的影響。
　　方法：取出生3-5天SD大鼠10只,解剖顯微鏡下無(wú)菌取出坐骨神經(jīng),剪碎后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),經(jīng)過(guò)純化后進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng),用S-100免疫組化鑒定雪旺細(xì)胞的純度,然后分別用濃度為0.1mg/ml、0.05mg/ml、0.025mg/ml的天麻素血清+DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),應(yīng)用MTT觀測(cè)雪旺細(xì)胞增長(zhǎng)曲線,采用共

2、焦激光掃描顯微鏡技術(shù)對(duì)傳代雪旺細(xì)胞內(nèi)NFG表達(dá)水平進(jìn)行測(cè)定。
　　結(jié)果：接種48h可看到貼壁生長(zhǎng)的雪旺細(xì)胞,其胞核多為長(zhǎng)形或圓形;胞體呈現(xiàn)立體感、飽滿的梭形體,兩端有細(xì)長(zhǎng)的突起,周圍有亮帶。第5d起,細(xì)胞胞體開(kāi)始肩并肩平行排列,自第10日,呈現(xiàn)出“端端相對(duì),極極相對(duì)”等網(wǎng)狀或旋渦狀規(guī)律排列,形如“地毯”。經(jīng)過(guò)S100免疫組化檢測(cè),結(jié)果顯示培養(yǎng)的坐骨神經(jīng)雪旺細(xì)胞純度達(dá)到92％。MTT比色實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:正常對(duì)照組中,雪旺細(xì)胞在24~7

3、2h出現(xiàn)快速增殖態(tài)勢(shì);72h后繼續(xù)增殖,但速度減緩,OD值逐日緩慢下降;自第5d起于倒置相差顯微鏡下可見(jiàn)雪旺細(xì)胞的胞體出現(xiàn)膨大、形態(tài)的立體感減弱。雪旺細(xì)胞增殖趨勢(shì)0.1mg/ml天麻素組與正常組相近,但每一個(gè)時(shí)間點(diǎn)較正常組峰值均低,自48h開(kāi)始與正常組出現(xiàn)顯著差異。0.05mg/ml天麻素組雪旺細(xì)胞呈現(xiàn)持續(xù)快速增殖現(xiàn)象,48h開(kāi)始與天麻1組出現(xiàn)差異,72h與正常組出現(xiàn)差異。0.025mg/ml天麻素組雪旺細(xì)胞總體增殖趨勢(shì)和OD值均與正常

4、組相近,48h開(kāi)始于0.1mg/ml天麻素組出現(xiàn)差異,72h與0.05mg/ml天麻素組出現(xiàn)差異。共焦激光掃描顯微鏡自采集圖像顯示:天麻素濃度為0.05mg/ml時(shí),雪旺細(xì)胞內(nèi)NGF的表達(dá)水平較其它各組別高,天麻素濃度為0.1mg/ml時(shí),雪旺細(xì)胞內(nèi)NGF的表達(dá)水平最差。
　　結(jié)論：1、雪旺細(xì)胞的增殖分化程度可以直接影響NFG的表達(dá)水平。2、天麻素濃度為0.1mg/ml時(shí)持續(xù)應(yīng)用,可在一定程度內(nèi)對(duì)雪旺細(xì)胞的增殖分化以及NFG表達(dá)產(chǎn)