雪旺細胞體外分離培養(yǎng)及甲基強地松龍對雪旺細胞分泌功能影響的研究.pdf

1、神經(jīng)再生室技術的出現(xiàn)，解決了短距離神經(jīng)再生的問題。但是除自體神經(jīng)移植外，其他人工修復技術尚無法解決長距離神經(jīng)缺損的問題。盡管組織工程技術在不斷發(fā)展，但體外構建的“人工神經(jīng)”還沒有從本質上超越再生室技術。其原因是組織工程中作為種子細胞的細胞老化、分泌能力下降等諸多問題。雪旺細胞是周圍神經(jīng)最主要的膠質細胞，也是最重要的種子細胞。雪旺細胞分泌多種神經(jīng)營養(yǎng)因子在神經(jīng)再生中發(fā)揮關鍵作用，但其分泌能力受諸多因素影響，甲基強地松龍(MP)被認為是一種

2、通過抑制脂質過氧化而對神經(jīng)細胞及其突起發(fā)揮保護作用的藥物。 目的： 1．采用新生SD大鼠的雪旺細胞作為周圍神經(jīng)組織工程的種子細胞，在體外分離培養(yǎng)，探索體外培養(yǎng)及增殖雪旺細胞的方法。 2．選取生長狀況和純度較好的第二代細胞，將經(jīng)胰酶消化下來的細胞接種到六孔板中，以不同濃度的MP作用于雪旺細胞，以研究MP對雪旺細胞分泌功能影響。 方法： 1．取SD大鼠的新生鼠雙側的坐骨、臂叢神經(jīng)，剪碎至1mm3大小的

3、組織塊，雙酶消化法進行分離培養(yǎng)，阿糖胞苷抑制成纖維細胞生長，低濃度胰酶快速消化傳代進一步純化雪旺細胞，用光鏡進行形態(tài)學觀察、S-100蛋白進行鑒定。 2．取生長狀況較好的第二代細胞，將經(jīng)胰酶消化下來的細胞接種到六孔板中，以不同濃度的MP(10-3、10-4、10-6、10-8mol/L)作用于雪旺細胞，作用24、48和72h，設立不加藥物的空白對照組，并通過RT-PCR的方法半定量檢測其分泌的NGF，以研究MP對雪旺細胞分泌功能

4、的影響。 結果： 1．通過上述方法分離培養(yǎng)獲得了經(jīng)S-100蛋白鑒定純度為88％的第二代雪旺細胞，細胞數(shù)量為3.128×107/ml，細胞形態(tài)多數(shù)為梭形，細胞排列成典型的漩渦狀或柵欄狀。 2. RT-PCR方法檢測后，經(jīng)Lab works 4.60軟件進行分析處理，以內參基因B-actin為基準分析各條帶的相對密度值，應用Spass 10.0軟件進行統(tǒng)計分析得出結論：10-8mol/L的MP作用72h分泌的NGF

5、與空白對照組比較及與其它濃度、時間組比較表達增加(p<0.05)；10-3 mol/L的MP在各時間段分泌的NGF與空白對照組及其它濃度、時間組比較表達減少(P<0.05)。 結論： 1．新生SD大鼠坐骨、臂叢神經(jīng)中分離培養(yǎng)雪旺細胞來源確實，取材方便，可以作為周圍神經(jīng)組織工程試驗研究的種子細胞來源，采用雙酶消化法、阿糖胞苷抑制成纖維細胞生長，可以獲得較高純度的雪旺細胞。 2．不同濃度的MP對雪旺細胞的分泌能力有不