ZAG在NAFLD小鼠中的表達(dá)變化及其對(duì)肝臟炎癥的影響.pdf

1、第一部分 ZAG在NAFLD發(fā)展中的動(dòng)態(tài)變化
　　目的：建立高脂飼料喂養(yǎng)的非酒精性脂肪性肝?。∟onalcoholic fatty liver disease，NAFLD）小鼠模型，動(dòng)態(tài)觀察鋅alpha2糖蛋白（Zinc alpha2 glycoprotein, ZAG）在NAFLD發(fā)展中的表達(dá)變化，初步探討ZAG與NAFLD的關(guān)系。
　　方法：48只8周齡雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分成高脂飲食組(HFD)和標(biāo)準(zhǔn)飲食組(SD

2、)，分別飼養(yǎng)4周、8周、12周和16周。H&E染色分析肝臟組織病理學(xué)改變；ELISA法檢測(cè)血清ZAG以及炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-8和IL-1β水平；新鮮肝臟勻漿檢測(cè)其甘油三酯（Triglyceride，TG）含量；實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)肝臟 ZAG的mRNA表達(dá)水平，Western-blotting技術(shù)及免疫組化法檢測(cè)肝臟ZAG的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：4周開始，HFD組小鼠血清TNF-α較SD組小鼠明顯升高(P<0

3、.05)，且隨NAFLD的發(fā)生而持續(xù)增加。8周起HFD組小鼠的IL-6、IL-8以及IL-1β逐漸升高(P<0.05)。4周起，HFD組小鼠肝臟 ZAG的mRNA及蛋白水平逐漸下降(P<0.05)，而血清ZAG濃度從8周開始明顯降低(P<0.05)。
　　結(jié)論：高脂飲食誘導(dǎo)C57BL/6小鼠發(fā)生NAFLD，其機(jī)制可能與肝臟ZAG表達(dá)水平的降低有關(guān)。
　　第二部分 ZAG對(duì)MCD飼料誘導(dǎo)的NAFLD小鼠肝臟脂質(zhì)代謝及炎癥的影響

4、
　　目的：建立MCD飼料喂養(yǎng)的非酒精性脂肪性肝炎（Nonalcoholic steatohepatitis，NASH）小鼠模型，尾靜脈注射rAAV2-ZAG-CMV-EGFP誘導(dǎo)其肝臟ZAG過表達(dá)，探討ZAG在NAFLD小鼠肝臟脂質(zhì)代謝及炎癥反應(yīng)中的作用。
　　方法：54只8周齡雄性C57BL/6小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，按體重隨機(jī)分為Control組（12只）、MCD+PBS組（14只）、MCD+ZAG組（14只）以及MCD+

5、GFP組（14只）。 Control組小鼠給予標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)8周，其余3組首先給予MCD飼料喂養(yǎng)4周，MCD+ZAG組小鼠給予尾靜脈注射 rAAV2-ZAG-CMV-EGFP2×1011vg/只,MCD+GFP組給予同劑量rAAV2-CMV-EGFP，MCD+PBS組給予同體積的PBS，繼續(xù)MCD飼料喂養(yǎng)4周。8周末處死所有小鼠，收集血清和肝臟組織。H&E及油紅O染色觀察肝臟組織病理學(xué)改變；生化及ELISA法檢測(cè)空腹血糖、血脂、炎癥因子T

6、NF-α、IL-6、IL-8、IL-1β水平以及肝臟TG含量；RT-qPCR、Western-blotting及免疫組化分別檢測(cè)肝臟 ZAG、脂代謝相關(guān)基因以及炎癥因子的mRNA和蛋白水平表達(dá)。
　　結(jié)果：8周末，MCD飼料喂養(yǎng)的小鼠，其飲食量、體重、肝濕重、血清TG、TC、LDL、HDL、FPG明顯降低（P<0.05），肝臟指數(shù)、ALT、AST、血清TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1β以及肝臟TG含量明顯升高（P<0.05

7、），肝臟脂肪分解相關(guān)基因HSL、PPARα、CPT1A的mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯降低（P<0.05），肝臟相關(guān)炎癥因子 TNF-α、IL-1β、ICAM-1、MCP-1、CD68、F4/80的mRNA和蛋白表達(dá)增加（P<0.05），同時(shí)，IL-6、IL-8的蛋白表達(dá)水平也明顯增加（P<0.05）。ZAG過表達(dá)的NASH小鼠，其肝濕重、血清TG、TC、肝臟指數(shù)、ALT、AST、血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平也有所降低（P<0.

8、05），血清LDL、HDL、FPG、IL-8無明顯差異（P>0.05）。ZAG過表達(dá)組小鼠，其肝臟脂肪分解相關(guān)基因HSL、PPARα、CPT1A的mRNA、蛋白水平增加（P<0.05），而炎癥因子TNF-α、IL-1β、ICAM-1、MCP-1、CD68、F4/80的mRNA和蛋白表達(dá)水平降低（P<0.05），且IL-6、IL-8的蛋白水平也明顯降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：ZAG能夠改善MCD飼料誘導(dǎo)的NAFLD小鼠肝臟脂肪