抗體化PDTRP基因免疫誘導(dǎo)的抗腫瘤效應(yīng)及GM-CSF增強(qiáng)作用的研究.pdf

1、X773129槿旦火擎碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼；10246論文編號(hào)t012101043抗體化PDTEP基因免疫誘導(dǎo)的抗腫瘤效應(yīng)及GMCSF增強(qiáng)作用的研究院系：專業(yè)：姓名；指導(dǎo)教師：完成日期：免疫學(xué)系免疫學(xué)夏明燦熊思東教授儲(chǔ)以徽副教授2004年5月12日抗體化PDTRP基因免疫誘導(dǎo)的抗舯癯效應(yīng)及(3MCSF增強(qiáng)作甩的研究中文摘要的插入未影響CDR3的構(gòu)象和抗原性。在此基礎(chǔ)上，我們將編碼3串聯(lián)拷貝的PDTRPDTRPDTRP基因克隆到編碼IgG

2、重鏈可變區(qū)的質(zhì)粒pBSVH62ANK的CDR3區(qū)，構(gòu)建了含有PDTRP抗原表位的IgG重鏈可變區(qū)重組質(zhì)粒pBSVH62ANKPDTRP，重組質(zhì)粒經(jīng)限制性內(nèi)切酶EcoRI消化后，回收免疫球蛋白重鏈可交區(qū)片段，并將此片段定向克隆到編碼免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)質(zhì)粒ylneo中，構(gòu)建完整的免疫球蛋白重鏈編碼質(zhì)粒ylneoPDTRP，通過酶切鑒定及測(cè)序后證明其構(gòu)建正確。進(jìn)一步，為了解重組質(zhì)粒ylneoPDTRP能否在真核細(xì)胞表達(dá)，將質(zhì)粒flneoPD

3、TRP經(jīng)電穿孔法轉(zhuǎn)染B淋巴瘤細(xì)胞株JS58L，ELISA的方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染上清中免疫球蛋白IgG的水平。結(jié)果表明：體外轉(zhuǎn)染J558L24小時(shí)后，細(xì)胞上清孛fgG的表達(dá)量為503ng／m!，高于對(duì)照組上清中IgG的表達(dá)量187ng／ml：轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，上清中IgG的表達(dá)量為35，64ng／ml，高于對(duì)照組上清中IgG的表達(dá)量185ng／ml。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示有顯著性差異(P001)，表明重組質(zhì)粒ylneoPDTRP能夠在體外有效表達(dá)，并且其表

4、達(dá)時(shí)間至少持續(xù)48小時(shí)。2抗體化PDTRP基因免疫誘導(dǎo)的特異性免疫應(yīng)答和抗腫瘤效應(yīng)為研究抗體化PDTRP基因免疫后能否誘導(dǎo)特異性免疫應(yīng)答，我們首先檢測(cè)了抗體化PDTRP基因免疫誘生的血清特異性IgG抗體。由于我們的前期實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)，71neo系列質(zhì)粒免疫的最佳途徑是經(jīng)脬免疫，所以，我們首選脾基因免疫，然后以肌肉免疫加強(qiáng)。即將重組質(zhì)粒flneoPDTRP于第0周經(jīng)脾基因免疫小鼠，空質(zhì)粒載體和生理鹽水作為陰性對(duì)照，第4周經(jīng)肌肉基因免疫加強(qiáng)。

5、免疫后分別于第l、2、4、6、8周采血。ELISA方法檢測(cè)小鼠血清中特異性抗PDTRP抗體水平。結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，1，1neoPDTRP免疫組小鼠血清在第l周即能檢測(cè)到特異性抗PDTRP抗體的表達(dá)(P／N=251)，血清中抗體水平到第8周達(dá)到36l。血清抗體滴度檢測(cè)結(jié)果表明：從第2周起，PDTRP特異性抗體滴度升高其對(duì)數(shù)絕對(duì)值為22，并維持至第8周。以上實(shí)驗(yàn)組結(jié)果與對(duì)照組相比，具有顯著性差異(P0001)。以上結(jié)果表明抗體他PDT

6、RP基因免疫誘生了體內(nèi)特異性抗PDn諍體液免疫應(yīng)答。進(jìn)一步，為了觀察抗體化PDH沖基因免疫后誘導(dǎo)的血清特異性抗體是否能與細(xì)胞表面的MUC1分子結(jié)合，我們將免疫血清與表達(dá)MUC1的人乳腺癌細(xì)胞株MCF7細(xì)胞共同孵育，通過免疫熒光的方法觀察MCF一7細(xì)胞表面的熒光強(qiáng)度。結(jié)果顯示：將免疫組血清與MCF7細(xì)胞共同孵育后，MCF一7細(xì)胞表面熒光顯示為陽(yáng)性，雨對(duì)照組未見熒光著色。表明由三串聯(lián)的抗原表位PDTRP誘導(dǎo)的特異性抗體能與MUCl相結(jié)合，這