NCPP對(duì)小鼠免疫增強(qiáng)作用及機(jī)理的研究.pdf

1、巨噬細(xì)胞在機(jī)體非特異性免疫和特異性免疫中起重要作用，它是參與免疫調(diào)節(jié)的重要細(xì)胞。單核/巨噬細(xì)胞系統(tǒng)除具有吞噬功能，還可發(fā)揮抗原呈遞(antigenpresentation)作用，屬于抗原呈遞細(xì)胞(antigen-presentationcell，APC)，可輔助T淋巴細(xì)胞活化，并與淋巴細(xì)胞相互刺激發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。巨噬細(xì)胞也是機(jī)體抗腫瘤免疫中的重要效應(yīng)細(xì)胞。巨噬細(xì)胞的抗腫瘤作用具有選擇性，即僅殺傷瘤細(xì)胞而不殺傷正常細(xì)胞，其殺傷效應(yīng)與腫瘤

2、的抗原結(jié)構(gòu)及瘤細(xì)胞增生周期無(wú)關(guān)，且可殺傷對(duì)化療、放療呈抗性的腫瘤細(xì)胞。另外，只有激活的巨噬細(xì)胞才可發(fā)揮抗瘤效應(yīng)。IL-1能促進(jìn)B淋巴細(xì)胞分泌抗體，T淋巴細(xì)胞表達(dá)IL-2受體，并分泌大量IL-2，還能增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺瘤活性等。TNF-α及NO是激活的巨噬細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的主要效應(yīng)分子。Klostergaard等發(fā)現(xiàn)，巨噬細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞至少存在兩種機(jī)制：即TNF-α介導(dǎo)的殺傷機(jī)制和NO介導(dǎo)的殺傷機(jī)制，兩者具有協(xié)同作用。TNF-α可通過(guò)誘導(dǎo)

3、腫瘤細(xì)胞調(diào)亡及抑制腫瘤血管形成，導(dǎo)致腫瘤出血壞死等途徑發(fā)揮作用；NO則使腫瘤細(xì)胞三羧酸循環(huán)中的烏頭酸酶DNA合成的限速酶及核糖核酸還原酶失活，而最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡。IFN-γ具有殺傷病毒和腫瘤的作用，誘導(dǎo)單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等MHCⅡ類抗原的表達(dá)，使其參與抗原提呈和特異性免疫的識(shí)別過(guò)程。協(xié)同誘導(dǎo)TNF并促進(jìn)巨噬細(xì)胞殺傷病原微生物。IFN抗腫瘤的機(jī)理可能是：抑制腫瘤細(xì)胞增殖；誘導(dǎo)NK、CTL等殺傷細(xì)胞，并協(xié)同IL-2增強(qiáng)LAK

4、活性；誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞表達(dá)MHCⅡ類抗原，增強(qiáng)對(duì)殺傷細(xì)胞的敏感性。短棒狀桿菌(CorynebacteriumParvum，CP)制劑(CPP)是一種非特異性免疫增強(qiáng)劑，它是用從健康人骨髓中分離的一種厭氧革蘭氏陽(yáng)性桿菌經(jīng)甲醛滅活制成的死菌苗。CPP促進(jìn)機(jī)體免疫反應(yīng)和抗腫瘤療效已被許多實(shí)驗(yàn)及臨床研究所證實(shí)，尤其在消退癌性胸水方面具有獨(dú)特療效。CPP抗腫瘤作用主要是通過(guò)對(duì)單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)強(qiáng)大而持久的刺激，引起Mφ增生、活化、吞噬功能增強(qiáng)及誘導(dǎo)分泌

5、腫瘤壞死因子(TNF-α)、干擾素(IFN)、白細(xì)胞介素(IL)、活性氧(H2O2、NO)等癌細(xì)胞殺傷因子及增強(qiáng)NK細(xì)胞殺傷活性，達(dá)到抑制和殺傷腫瘤細(xì)胞的目的。分子免疫研究的進(jìn)展加深了人們對(duì)免疫系統(tǒng)抗腫瘤功能及免疫治療作用重要性的認(rèn)識(shí)。目前，CPP可以說(shuō)是激活Mφ活性最好的制劑之一，但副作用較大限制了其臨床應(yīng)用。若能利用現(xiàn)代高科技手段制備出療效好、副作用低的新制劑，將有著重要的應(yīng)用價(jià)值。為此，我們?cè)趯?duì)CP進(jìn)行深入研究的基礎(chǔ)上，利用先進(jìn)的

6、納米技術(shù)，制備出了無(wú)細(xì)胞短棒狀桿菌納米級(jí)制劑(NCPP)。新制劑不但完全具備CPP的抗腫瘤活性，且副作用明顯低于CPP。本文進(jìn)一步研究了NCPP增強(qiáng)免疫的作用及其機(jī)理，為進(jìn)一研究其抗腫瘤作用提供理論依據(jù)。 方法1.NCPP是通過(guò)采用納米技術(shù)破碎CP，經(jīng)離心去除無(wú)效的上清部分，收集沉淀部分制備的新制劑。 2.將小鼠隨機(jī)分為3組，分別為NCPP組、CPP組及對(duì)照組。3組小鼠分別在腹腔注射NCPP、CPP和生理鹽水第10天時(shí)處

7、死并分別稱體重和脾重，計(jì)算脾指數(shù)。 3.將小鼠隨機(jī)分為NCCP實(shí)驗(yàn)組、CPP實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，三組小鼠腹腔注射艾氏腹水癌細(xì)胞，于注射癌細(xì)胞前1天及注射后次日起，連續(xù)(間隔1天)腹腔分別注射NCPP、CPP和生理鹽水5次，計(jì)算小鼠存活率。小鼠腹腔注射NCPP、CPP或生理鹽水10天后，分別測(cè)定腹腔巨噬細(xì)胞(Mφ)吞噬率、吞噬指數(shù)、過(guò)氧化氫(H2O2)、一氧化氮(NO)、腫瘤壞死因子(TNF)、干擾素(IFN)、白細(xì)胞介素(IL)等細(xì)

8、胞因子水平、脾臟自然殺傷(NK)細(xì)胞殺傷率及T細(xì)胞增殖指數(shù)。 結(jié)果：NCPP組和CPP組與對(duì)照組相比均有明顯的抑瘤作用；脾指數(shù)均大于2.0；腹腔Mφ吞噬率、吞噬指數(shù)、產(chǎn)生H2O2、一氧化氮(NO)、腫瘤壞死因子(TNF)、干擾素(IFN)、白細(xì)胞介素(IL)等細(xì)胞因子的量均有顯著的提高(P＜0.01)；脾臟NK細(xì)胞殺傷率也均有明顯提高(P＜0.05)；但脾臟T細(xì)胞增殖指數(shù)均無(wú)明顯差異(P＞0.05)。上述所有實(shí)驗(yàn)中，NCPP和C

9、PP兩組間均無(wú)明顯差異(P＞0.05)。表明NCPP具有與CPP相同的脾激活及抑瘤作用，其機(jī)理可能是通過(guò)強(qiáng)力激活Mφ及NK細(xì)胞吞噬、殺傷功能所致。NCPP的毒性低于CPP。 結(jié)論NCPP與CPP具有相同的作用，能激活巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫效應(yīng)細(xì)胞，使之分泌多種細(xì)胞因子及重要介質(zhì)。它們能有效地增強(qiáng)機(jī)體的免疫效應(yīng)，可引起免疫小鼠脾臟腫大，巨噬細(xì)胞增殖加快，腹腔巨噬細(xì)胞明顯增多，吞噬功能明顯增強(qiáng)，并能增強(qiáng)NK細(xì)胞殺傷活性，從而達(dá)到抑