CpG-ODN免疫增強(qiáng)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、　　目的：設(shè)計(jì)含非甲基化胞嘧啶和鳥嘌呤的寡聚脫氧核糖核苷酸(CpG-ODN),以期用足月新生兒臍血篩選出具有較強(qiáng)免疫增強(qiáng)作用的CpG-ODN；比較CpG-ODN對(duì)新生兒(早產(chǎn)兒和足月兒)臍血和成人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)的增殖效應(yīng)；觀察CpG-ODN對(duì)孕鼠及其新生鼠、免疫抑制鼠和老年鼠體液免疫功能的影響。
　　方法：按不同設(shè)計(jì)原則設(shè)計(jì)5種CpG-ODN,用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色(MTT)法從中篩選出具有較強(qiáng)免疫增強(qiáng)作用的

2、CpG-ODN；用MTT法觀察CpG-ODN對(duì)新生兒(早產(chǎn)兒和足月兒)臍血和成人外周血單個(gè)核細(xì)胞增殖的差異性。用公認(rèn)對(duì)正常小鼠有明顯免疫增強(qiáng)作用的CpG1826(5’-TCCATCTCACGTTCCTGACGTT-3’)免疫孕鼠(20μg/只)、免疫抑制鼠(20μg/只)和老年鼠(20μg/只或30μg/只),用ELISA法檢測(cè)孕鼠及其新生鼠、免疫抑制鼠和老年鼠的血清IgG抗體,并取小鼠脾臟進(jìn)行病理切片并HE染色,在鏡下觀察脾臟的細(xì)胞結(jié)

3、構(gòu)變化。
　　結(jié)果：篩選出1條具有較強(qiáng)免疫增強(qiáng)作用的CpG-ODN(5’-GGTGCATCGATGCAGGGGGG-3)。該條CpG-ODN對(duì)成人PBMC增殖效應(yīng)最明顯,其次是足月兒,但對(duì)早產(chǎn)兒的增殖效應(yīng)不明顯；CpG1826可以提高正常成年、免疫抑制鼠和老年鼠血清IgG抗體水平,對(duì)孕鼠及其子鼠血清IgG水平無明顯影響；20μg/只的CpG1826劑量沒有導(dǎo)致胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩(IUGR)等并發(fā)癥。
　　結(jié)論：①M(fèi)TT法是一種

4、篩選具有免疫增殖效應(yīng)CpG-ODN的理想實(shí)驗(yàn)方法；②新生兒臍血可作為篩選CpG-ODN免疫增殖效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)材料；③CpG-ODN(5’-GGTGCATCGATGCAGGGGGG-3’)具有明顯的免疫增強(qiáng)作用,早產(chǎn)兒、足月兒臍血和成人外周血單個(gè)核細(xì)胞對(duì)該CpG-ODN反應(yīng)具有差異性；④以20μg/只的CpG1826劑量免疫孕鼠,孕鼠及其新生鼠沒有出現(xiàn)免疫增強(qiáng)作用,也未導(dǎo)致IUGR等不良反應(yīng)；⑤CpG1826對(duì)正常成年鼠、免疫抑制鼠和老年鼠均