炎癥因子及外膜炎癥反應(yīng)與移植血管動(dòng)脈硬化早期發(fā)病關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：近年來，心臟移植已經(jīng)成為治療終末期心臟病的有效方法。由于免疫抑制藥物、器官保存及手術(shù)方法的改進(jìn)，使得心臟移植病人的短期及長(zhǎng)期效果都得到明顯改善。移植物動(dòng)脈硬化是限制心臟移植病人長(zhǎng)期存活的主要因素，也是各種移植器官晚期失功的主要原因。其表現(xiàn)為嚴(yán)重的、彌漫性的血管內(nèi)膜增生，血管腔逐漸狹窄，最終導(dǎo)致移植器官缺血性功能衰竭，因此移植物動(dòng)脈硬化是近年來人們研究的熱點(diǎn)。研究移植物動(dòng)脈硬化的動(dòng)物模型有多種，多數(shù)采用顯微外科縫合技術(shù)進(jìn)行模型制作，

2、需要精巧的顯微外科技術(shù)，且容易產(chǎn)生吻合口出血及狹窄，技術(shù)問題限制了這些模型的廣泛應(yīng)用。移植物動(dòng)脈硬化的基本病理改變?yōu)槭紫乳_始于末梢小血管，最終累及整個(gè)心肌內(nèi)和心外膜的全部動(dòng)脈，產(chǎn)生彌漫性、向心性內(nèi)膜肥厚，最后血管閉鎖。其確切發(fā)病機(jī)制尚未闡明，可能是一個(gè)由免疫因素及非免疫因素均參與的病理生理過程。近年來，炎癥反應(yīng)尤其是外膜炎癥在動(dòng)脈硬化的發(fā)病中引起較廣泛的關(guān)注，部分學(xué)者認(rèn)為外膜炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈硬化的發(fā)病中起到一定作用。本研究的目的是采用袖套

3、管法建立大鼠胸主動(dòng)脈腹腔移植慢性排斥反應(yīng)模型，利用該模型研究血清炎癥因子及外膜炎癥反應(yīng)在移植物動(dòng)脈硬化早期發(fā)病中的作用。 方法：采用近交系SD大鼠及Wistar大鼠，體重130～150g者為供體，體重250～350g者為受體，隨機(jī)分為兩組：異系(SD-Wistar)移植實(shí)驗(yàn)組，同系(Wistar-Wistar)移植對(duì)照組。采用袖套管技術(shù)，將供體胸主動(dòng)脈移植到受體腹主動(dòng)脈，建立大鼠胸主動(dòng)脈腹腔移植慢性排斥反應(yīng)模型，于術(shù)后1周、2周

4、、3周、4周、8周、12周各取移植動(dòng)脈行病理切片檢查。待套管法建立胸主動(dòng)脈腹腔移植慢性排斥反應(yīng)模型成功后，把36只同種異體胸主動(dòng)脈腹腔移植大鼠及16只同系移植對(duì)照大鼠隨機(jī)分成4大組(每大組中，實(shí)驗(yàn)小組9只，對(duì)照小組4只)：A大組，術(shù)后1周處死；B大組，術(shù)后2周處死；C大組，術(shù)后3周處死；D大組，術(shù)后4周處死。術(shù)前及處死時(shí)抽血分離留取血清，使用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清炎癥因子(CRP，IL-6，TNF-a)水平，處死后留取血管標(biāo)本，HE染色

5、觀察血管病理改變，用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)血管外膜炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及a-肌動(dòng)蛋白(a-actin)、周期蛋白依賴性激酶1(CDKl)、增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)在血管壁中的表達(dá)。對(duì)比各組與術(shù)前血清炎癥因子水平變化及各組間觀察指標(biāo)的變化。結(jié)果：利用袖套管技術(shù)建立大鼠胸主動(dòng)脈腹腔移植慢性排斥反應(yīng)模型，正式手術(shù)60只，手術(shù)成功55只，成功率91.7﹪，5只死亡(1只死于腰動(dòng)脈受累；2只死于遲發(fā)腹腔出血；2只死于腹腔感染并發(fā)肺炎)。手術(shù)平均時(shí)間50mi

6、n，移植血管冷缺血時(shí)間15～20min，移植血管熱缺血時(shí)間3～8min(相當(dāng)于腹主動(dòng)脈阻斷時(shí)間)。移植動(dòng)脈病理切片顯示，異系移植實(shí)驗(yàn)組：術(shù)后第1周，外膜大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；術(shù)后第2周，外膜有輕度膠原纖維增生伴炎癥浸潤(rùn)；術(shù)后第4周，外膜明顯增厚，內(nèi)有大量增生的平滑肌細(xì)胞、膠原纖維及炎癥細(xì)胞，血管中層斷裂，可見外膜平滑肌細(xì)胞遷移至內(nèi)膜，內(nèi)膜亦出現(xiàn)明顯纖維化及平滑肌細(xì)胞增生；術(shù)后第12周，內(nèi)膜明顯增厚，平滑肌細(xì)胞增殖并伴有外膜炎癥浸潤(rùn)。同系移植

7、對(duì)照組移植血管未見明顯改變。移植術(shù)后A、B、C、D四大組血清炎癥介質(zhì)水平均較術(shù)前基礎(chǔ)水平增高。C-反應(yīng)蛋白(CRP)水平，各對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組均較術(shù)前基礎(chǔ)水平明顯增高(P<0.01)，B、C、D大組中實(shí)驗(yàn)小組較對(duì)照小組明顯升高(P<0.01)；白細(xì)胞介素6(interleukin-6，IL-6)水平，B大組的實(shí)驗(yàn)小組較術(shù)前升高(P<0.05)，A、C、D大組的實(shí)驗(yàn)小組較術(shù)前明顯升高(P<0.01)，A、B、C大組的對(duì)照小組較術(shù)前基礎(chǔ)水平升高

8、(P<0.05)，A、C、D大組的實(shí)驗(yàn)小組較對(duì)照小組水平明顯升高(P<0.01)；腫瘤壞死因子(tumornecrosis factor-alpha，TNF-a)水平，A、B、C大組的實(shí)驗(yàn)小組較術(shù)前升高(P<0.01)，D大組的實(shí)驗(yàn)小組較術(shù)前明顯升高(P<0.01)，A、B、C、D大組的對(duì)照小組與術(shù)前相比無明顯變化。隨時(shí)間推移，血管外膜平滑肌細(xì)胞中，a-actin、PCNA和CDK1表達(dá)進(jìn)行性增高(P<0.05)，且其表達(dá)早于內(nèi)膜。