CYR61和炎癥因子與頸動(dòng)脈血管再狹窄關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病是世界上最常見的心臟病，發(fā)病率和死亡率高，嚴(yán)重威脅到了人類的健康。PTCA和支架安置術(shù)是目前冠心病血管重建治療的主要手段，但術(shù)后再狹窄的發(fā)生極大的限制了其遠(yuǎn)期療效。 正常情況下血管內(nèi)皮可產(chǎn)生各種物質(zhì)來調(diào)節(jié)血管緊張度，保護(hù)血管壁。血管損傷時(shí)有效的血管舒張活性的降低，抗粘附物質(zhì)的減少，及伴發(fā)的血管收縮物質(zhì)的增加，從而導(dǎo)致血管緊張度的增加，炎性細(xì)胞和血小板的粘附，中層平滑肌細(xì)胞的遷移和增殖，這都增加了血栓形成和

2、脈管阻塞及新生內(nèi)膜形成的危險(xiǎn)。實(shí)驗(yàn)證實(shí)新生內(nèi)膜增生程度與內(nèi)皮剝脫范圍成正比，平滑肌細(xì)胞及新生內(nèi)膜異常增生的情況往往存在于損傷后沒有內(nèi)皮化或內(nèi)皮化延遲的區(qū)域。而新生內(nèi)膜的形成是血管再通術(shù)（如血管成形術(shù)，支架術(shù)和旁路移植術(shù)）后再狹窄的病理基礎(chǔ)，研究發(fā)現(xiàn)血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)的過度增殖并遷移至內(nèi)膜所致新生內(nèi)膜增厚是再狹窄發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。 CCN家族包括富半胱氨酸61(Cyr61，CCN1)、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF，CCN2)、

3、Nov(腎母細(xì)胞瘤過度表達(dá)基因，CCN3)，WISP-1(Writ-l induced secreted protein 1，CCN4)，HICP（Heparin-inducible，CTGF，CCN5),和WISP-3(CCN6)。Cyr61是生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的即刻早期基因，能編碼神秘的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白。Cyr61具有多種生物學(xué)功能，在體內(nèi)能誘導(dǎo)血管的形成，支持細(xì)胞的黏附，促進(jìn)細(xì)胞的遷移、增殖、分化，并能增強(qiáng)生長(zhǎng)因子促進(jìn)成纖維細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞

4、有絲分裂的作用。研究發(fā)現(xiàn)，在粥樣硬化病變、再狹窄血管等處有Cyr61的表達(dá)，同時(shí)Cyr61具有活化單核細(xì)胞的功能。當(dāng)血管受損后，內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、單核細(xì)胞等能合成大量的炎癥因子。盡管Cyr61的病理生理學(xué)功能已多數(shù)明確，但是在再狹窄血管、粥樣硬化病變等處高表達(dá)的Cyr61與單核細(xì)胞相互作用的功能說明Cyr61蛋白可能在炎癥應(yīng)答過程中亦起重要作用。迄今為止，許多研究提示Cyr61可能參與了血管損傷后內(nèi)膜的過度增生和血管的再狹窄。

5、 因此，本試驗(yàn)在建立大鼠頸動(dòng)脈血管成形術(shù)模型的基礎(chǔ)上，通過觀察大鼠頸總動(dòng)脈球囊損傷后表達(dá)CYR61的變化及組織炎癥因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)的變化，探討頸動(dòng)脈血管內(nèi)膜損傷后導(dǎo)致血管增生再狹窄的病理生理機(jī)制。 第一部分、大鼠頸動(dòng)脈血管成形術(shù)模型的建立 目的: 通過建立大鼠頸動(dòng)脈血管成形術(shù)模型，觀察大鼠損傷血管的增生及再狹窄變化。 方法: 42只大鼠隨機(jī)分為兩組：模型組和對(duì)照組。模型組用2F Foga

6、rty 球囊導(dǎo)管損傷大鼠左頸總動(dòng)脈。分別在不同時(shí)間點(diǎn)取材，采用組織形態(tài)學(xué)觀察術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)血管壁的病理變化。 結(jié)果: 大鼠頸總動(dòng)脈損傷后引起血管內(nèi)皮細(xì)胞剝脫，新生內(nèi)膜形成并增生，促使管腔狹窄。實(shí)驗(yàn)中可見新生內(nèi)膜在術(shù)后7天出現(xiàn)，術(shù)后28天時(shí)達(dá)到高峰，形成的新生內(nèi)膜厚度不均，較對(duì)照組明顯增厚。 結(jié)論: 大鼠頸動(dòng)脈血管成形術(shù)造成血管再狹窄，其造模成功率高，操作簡(jiǎn)便，疾病模型接近人類，能夠?yàn)檫M(jìn)一步研究提供理想的動(dòng)物模型。

7、 第二部分、CYR61在大鼠頸動(dòng)脈損傷血管的表達(dá)變化 目的: 通過建立大鼠頸動(dòng)脈血管成形術(shù)的損傷再狹窄模型，研究CYR61在大鼠頸動(dòng)脈血管損傷后的表達(dá)變化。 方法:42只大鼠隨機(jī)分為兩組：模型組和對(duì)照組。模型組用2F Fogarty 球囊導(dǎo)管損傷大鼠左頸總動(dòng)脈。分別在不同時(shí)間點(diǎn)取材，采用組織形態(tài)學(xué)觀察術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)血管壁的病理變化和采用免疫組織化學(xué)、實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)((Realtime PCR))觀察術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)血

8、管壁表達(dá)CYR61的變化。 結(jié)果: 實(shí)驗(yàn)中可見新生內(nèi)膜在術(shù)后7天出現(xiàn)，術(shù)后28天時(shí)達(dá)到高峰，形成的新生內(nèi)膜厚度不均，較對(duì)照組明顯增厚。同時(shí)，大鼠頸總動(dòng)脈損傷后引起CYR61的表達(dá)明顯升高，與正常對(duì)照組相比有顯著性差異。 結(jié)論: 大鼠頸總動(dòng)脈球囊損傷后CYR61的表達(dá)明顯增強(qiáng)，提示CYR61可能參與大鼠頸動(dòng)脈血管損傷后的再狹窄過程。 第三部分、CYR61和炎癥因子與頸動(dòng)脈血管損傷再狹窄關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究 目的:

9、 通過建立大鼠頸動(dòng)脈血管成形術(shù)的損傷再狹窄模型，研究CYR61及組織炎癥因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)參與大鼠頸動(dòng)脈血管損傷后再狹窄的發(fā)生。 方法:　 42只大鼠隨機(jī)分為兩組：模型組和對(duì)照組。模型組用2F Fogarty 球囊導(dǎo)管損傷大鼠左頸總動(dòng)脈。分別在不同時(shí)間點(diǎn)取材，采用組織形態(tài)學(xué)觀察術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)血管壁的病理變化，采用免疫組織化學(xué)、實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(Realtime PCR)觀察術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)血管壁表達(dá)CYR

10、61的變化和采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)觀察術(shù)后組織炎癥因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)的變化以及采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)測(cè)定血清炎癥因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)的變化。 結(jié)果: 球囊損傷后新生內(nèi)膜在術(shù)后7天出現(xiàn)，術(shù)后28天時(shí)達(dá)到高峰，形成的新生內(nèi)膜厚度不均，較對(duì)照組明顯增厚。大鼠頸總動(dòng)脈損傷后引起CYR61的表達(dá)及組織炎癥因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)明顯升高，與正常對(duì)照組相比有顯著性差異。而檢