β-catenin與Cyr61在肝癌中的表達(dá)及機(jī)制研究.pdf

1、目的： Wnt/β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異常激活可導(dǎo)致胚胎發(fā)育異常和腫瘤發(fā)生，如該通路的核心分子β-catenin異常表達(dá)與肝癌發(fā)生有關(guān)。Cyr61是一種細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)蛋白，可發(fā)揮多種生理功能，包括介導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)的形成、細(xì)胞增殖、分化和黏附、促進(jìn)細(xì)胞遷移和血管形成。近來(lái)Cyr61與腫瘤的關(guān)系日益受到關(guān)注，但與腫瘤發(fā)生的確切關(guān)系及機(jī)理至今不明。本研究首先檢測(cè)β-catenin與Cyr61在肝癌細(xì)胞株和肝癌病例組織中的表達(dá)，觀

2、察肝癌發(fā)生時(shí)，Cyr61表達(dá)與β-catenin表達(dá)的關(guān)系。進(jìn)而以肝癌細(xì)胞株HepG2為模型，研究過(guò)表達(dá)外源性β-catenin和RNA干擾抑制內(nèi)源性β-catenin表達(dá)時(shí)，對(duì)Cyr61表達(dá)調(diào)控。通過(guò)研究為探討肝癌發(fā)生中β-catenin是否調(diào)控了Cyr61表達(dá)，進(jìn)一步揭示Cyr61在肝癌發(fā)生中的作用和機(jī)制奠定基礎(chǔ)，為腫瘤診斷與治療提供新的腫瘤標(biāo)志物和基因治療靶點(diǎn)。 方法： 1.采用免疫組化SP染色法和RT-PCR檢測(cè)

3、人肝癌細(xì)胞株HepG2、QGY-7701、鼠肝癌細(xì)胞株H22和正常肝細(xì)胞株L02中β-catenin和Cyr61蛋白水平與mRNA水平的表達(dá)。 2.采用免疫組化SP染色法檢測(cè)62例肝細(xì)胞肝癌病人癌組織中β-catenin與Cyr61蛋白的表達(dá)，統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析二者與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，并比較二者的相關(guān)性。 3.采用RT-PCR檢測(cè)30例肝細(xì)胞肝癌病人癌組織中β-catenin與Cyr61mRNA的表達(dá)水平，并比較二者的

4、相關(guān)性。 4.應(yīng)用293細(xì)胞擴(kuò)增重組腺病毒Adβ-catenin、AdGFP、Adsi-β-catenin，構(gòu)建并擴(kuò)增RNA干擾對(duì)照腺病毒AdSES-hus。 5.Adβ-catenin、AdGFP直接感染HepG2細(xì)胞，RT-PCR檢測(cè)感染后的1～3dβ-catenin和Cyr61的表達(dá)變化。 6.Adsi-β-catenin、AdSES-hus直接感染HepG2細(xì)胞，RT-PCR檢測(cè)感染后的2～4dβ-cat

5、enin和Cyr61的表達(dá)變化。 結(jié)果： 1.正常肝細(xì)胞株L02及肝癌細(xì)胞株HepG2、QGY-7701、H22q中β-catenin與Cyr61mRNA與蛋白均有表達(dá)，二者表達(dá)一致率達(dá)100％。 2.62例肝癌病例組織標(biāo)本中，85.48％(53/62)β-catenin蛋白過(guò)表達(dá)，其過(guò)表達(dá)與靜脈浸潤(rùn)、癌灶轉(zhuǎn)移、結(jié)節(jié)數(shù)的多少和AFP有關(guān)(P＜0.05)，而與腫塊大小、癌栓形成之間的關(guān)系無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。77.42％(

6、48/62)Cyr61蛋白過(guò)表達(dá)，其過(guò)表達(dá)與靜脈浸潤(rùn)、癌灶轉(zhuǎn)移和結(jié)節(jié)數(shù)的多少有關(guān)(P＜0.05)，而與腫塊大小、癌栓形成和AFP的關(guān)系無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。β-catenin蛋白與Cyr61蛋白同時(shí)過(guò)表達(dá)的病例有72.58％(45/62)，同時(shí)陰性表達(dá)的病例有10％(6/62)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示Cyr61蛋白與β-catenin蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.435，P＜0.05)3.30例肝癌病例組織標(biāo)本中β-cateninmRNA和Cyr61mRN

7、A表達(dá)率均為100％，根據(jù)RT-PCR半定量結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，β-cateninmRNA表達(dá)與Cyr61mRNA表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.856，P＜0.01)4.Adβ-catenin感染的HepG2細(xì)胞與AdGFP感染的HepG2細(xì)胞相比，β-catenin在感染24h后表達(dá)增強(qiáng)，Cyr61在感染后24h表達(dá)也隨之增強(qiáng)。 5.Adsi-β-catenin感染的HepG2細(xì)胞與AdSES-hus感染的HepG2細(xì)胞相比較，Ads

8、i-β-catenin在感染后48h明顯表達(dá)下調(diào)，Cyr61在48h也明顯表達(dá)下調(diào)。 結(jié)論： 1.β-catenin與Cyr61在肝癌細(xì)胞株和肝癌組織中表達(dá)高度一致，提示在肝癌中，Cyr61的過(guò)表達(dá)可能與β-catenin的過(guò)表達(dá)有關(guān)，二者過(guò)表達(dá)可能在肝癌的發(fā)生和侵襲轉(zhuǎn)移中起到重要作用。 2.在HepG2細(xì)胞中導(dǎo)入β-catenin基因過(guò)表達(dá)β-catenin后，與對(duì)照相比，上調(diào)了Cyr61的表達(dá)；而在導(dǎo)入si-