血脂異常在動脈粥樣硬化血管外膜炎癥中作用的研究.pdf

1、目的：高脂飲食建立As模型，探討：①血脂異常與血管外膜炎癥細胞浸潤、外膜成纖維細胞表型轉化以及核因子K Bp65(Nuclear factor Kappa B．NF-KappaB)活性的關系；②外膜炎癥細胞浸潤與As病變程度的關系；③成纖維細胞NF-K Bp65活性與其表型轉化的關系；④氟伐他汀對As外膜炎癥細胞浸潤及成纖維細胞表型轉化和NF-K Bp65活性的影響。 結果：(1)高脂飲食組及氟伐他汀組總膽固醇(Total ch

2、olesterol，TC)及低密度脂蛋白(low-dentity lipoprotein，LDL)較正常對照組均明顯增高(P<0.01)，但氟伐他汀組與高脂飲食組比較明顯降低(P<0.01)：(2)高脂飲食組及氟伐他汀組動脈內(nèi)膜均較正常對照組明顯增厚(P<0.01)，有明顯粥樣斑塊形成，但氟伐他汀組與高脂飲食組比較，內(nèi)膜厚度及斑塊面積明顯減少(P<0.01)；(3)正常對照組血管外膜幾乎無炎癥細胞浸潤，血管外膜成纖維細胞也幾乎無α-SM

3、actin表達及NF-KBp65活性：高脂飲食組及氟伐他汀組血管外膜均有明顯炎癥細胞浸潤，成纖維細胞NF-KBp65活性及α-SMactin表達增加，但氟伐他汀組較高脂飲食組外膜炎癥細胞浸潤、成纖維細胞NF-KBp65活性及α-SMactin的表達均明顯減少(P<0.05)；(4)高脂飲食組及氟伐他汀組TC及LDL與主動脈外膜炎癥細胞數(shù)、NF-κBp65活性及α-SMaetin表達均皇正相關，以LDL相關性較好(高脂組LDL與外膜炎癥細

4、胞數(shù)及NF-κBp65活性的相關系數(shù)均為r=0.683，P<0.05，LDL與α-SMaetin表達的相關系數(shù)為r=0.708，P<0.05；他汀組LDL與外膜炎癥細胞數(shù)及NF-κBp65活性的相關系數(shù)分別為r=0.775，P<0.01，r=0.726，P<0.05；LDL與α-SMactin表達的相關系數(shù)為r=0.769，P<0.01；)，HDL與外膜炎癥細胞數(shù)、NF-κB活性及α-SMactin表達呈負相關；TG無明顯相關性(P>0

5、.05)；(5)高脂飲食組和氟伐他汀組外膜成纖維細胞NF-κBp65活性與α-SMactin的表達呈顯著正相關(相關系數(shù)分別為r=0.633及0.649，p<0.05)，外膜炎癥細胞浸潤與斑塊面積呈正相關(相關系數(shù)分別為r=0.648及0.663，p<0.05)。結論：(1)實驗性高脂飲食建立As模型成功，高脂飲食可以引起血脂明顯異常。(2)HC尤其是LDL升高與As血管外膜炎癥、外膜成纖維細胞表型轉化及NF-κBp65的活性有關；(3

6、)血管外膜炎癥細胞浸潤與As病變程度呈正相關；(4)外膜成纖維細胞NF-κBp65的活性與其表型轉化呈正相關；(5)氟伐他汀能抑制As血管外膜炎癥細胞浸潤及外膜成纖維細胞表型轉化和NF-κB的活性。 論文Ⅱ氧化低密度脂蛋白對成纖維細胞表型轉化、增殖及炎癥因子合成的影響背景：成纖維細胞是血管外膜的主要細胞成分，在正常狀態(tài)下，血管外膜成纖維細胞(Adventitial fibroblasts，AF)處于相對"靜止"狀態(tài)，但某些病理狀

7、態(tài)下，"靜止"的AF可以轉化為肌成纖維細胞(Myofibroblasts，MF)，MF是具有平滑肌細胞特點的成纖維細胞，能分泌多種細胞因子和炎癥介質(zhì)，參入免疫和炎癥反應。我們在動物實驗中發(fā)現(xiàn)：As的血管外膜成纖維細胞被激活、轉化為MF，且AF的轉化與HC尤其是LDI。升高呈正相關，但LD[.能否引起成纖維細胞表型轉化、增殖及炎癥因子合成目前國內(nèi)外鮮見報道，為此，我們應用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)直接作用于培養(yǎng)的成纖維細胞，觀察ox

8、-LDI。對成纖維細胞的表型轉化、增殖及炎癥因子合成的影響。 目的：用含有OX-LDL的培養(yǎng)基孵育人胚肺成纖維細胞(HEFs)，并用IKB-a磷酸化抑制劑BAY11-7082進行干預，觀察成纖維細胞的表型變化、增殖及炎癥因子合成的變化，以探討OX-LDL對成纖維細胞的影響及其機制。 結果：1、細胞特性鑒定顯示：培養(yǎng)的細胞特異性Vimentin抗原染色陽性，α-SMactin陰性；2、MTT比色顯示：50μg/ml

9、及100μg/ml的OX-LDL組細胞增殖率均較正常對照組明顯增強，差異有顯著性(P<0.05)，BAY11-7082組細胞增殖率較正常對照組比較無顯著性差異(P>0.05)；3、流式細胞儀檢測顯示：不同濃度的OX-LDL均能使進入G<,1>期或S期的細胞增加，以100μg/ml OX-LDL組進入S期的成纖維細胞最多，與正常組比較有顯著性差異(P<0.05)，BAY11-7082組細胞周期與正常對照組比較無顯著性差異(P>0.05)；

10、4、正常對照組和BAY11-7082組HEFs幾乎無NF-κBp65的活性及α-SMactin表達，TGF-β<,1>的表達微弱，原位雜交檢測顯示：正常對照組幾乎無NF-κBp65mRNA表達，而BAY11-7082組NF-κBp65mRNA表達明顯，兩組細胞TGF-β<,1>mRNA表達微弱；OX-LDL各組均有α-SMactin、TGF-β<,1>表達及NF-κBp65的活性，與原位雜交檢測顯示的NF-κBp65mRNA及TGF-β

11、<,1>mRNA表達增加一致，且呈濃度依賴性，各組間有顯著性差異(P<0.05)；5、正常對照組和BAY11-7082組無MCP-1及MCP-lmRNA的表達，也無IL-1α、IL-6的分泌；ox-LDL各組均能刺激HEFs表達MCP-1及MCP-lmRNA并分泌IL-1、IL-6，且呈濃度依賴性，各組間差異具有顯著性(P<0.05)。IL-lα、IL-6的含量均與MCP-1的表達呈顯著正相關，相關系數(shù)分別為r=0.932，0.834(

12、P<0.01)．。結論：(1)ox-LDL能誘導成纖維細胞表型轉化，且呈濃度依賴性；(2)不同濃度的ox-LDL均能影響成纖維細胞的細胞周期，使細胞的增殖增加；(3)ox-LDL能濃度依賴性的誘導成纖維細胞表達炎癥因子MCP-1及IL-1α、IL-6：(4)ox-LDL誘導成纖維細胞合成IL-1α、IL-6可能與MCP-1的表達增加有關；(5)ox-LDL可能通過NF-KB通路誘導成纖維細胞的表型轉化、增殖和炎癥因子的合成。 氟

13、伐他汀對氧化低密度脂蛋白誘導的成纖維細胞遷移及炎癥因子合成的干預作用背景：大量臨床實驗已證實3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶抑制劑(3-Hydroxy-3-methyglutary coenzyme A reductase inhibitors，HMCI)能明顯減少冠心病的臨床事件，其降脂作用已眾所周知，而其非降脂作用尤其是抗炎作用是近幾年的研究熱點，但大多數(shù)研究主要是針對HMCI對血管內(nèi)膜炎癥的影響，有關HMCI對As血管外膜影響

14、的研究目前國內(nèi)外報道較少。我們在前期動物實驗中觀察到HMCI類藥物．氟伐他汀能明顯抑制As的血管外膜炎癥細胞浸潤及外膜成纖維細胞的表型轉化和NF-KBp65的活性，說明氟伐他汀具有抗As血管外膜炎癥、抑制成纖維細胞的表型轉化，改善血管重塑的作用，但這種作用是否獨立于降脂作用之外尚不清楚，為此，我們在HEFs的培養(yǎng)基中直接加入不同濃度的氟伐他汀及ox-LDL，觀察對HEFs的遷移和炎癥因子合成的影響。 目的：將HEFs在含有氟伐他

15、汀及ox-LDL的培養(yǎng)基中孵育，觀察成纖維細胞的遷移及炎癥因子合成的變化，以探討氟伐他汀對ox-LDL誘導的成纖維細胞變化的抑制作用。 結果：(1)細胞特性鑒定同第二部分；(2)各濃度的氟伐他汀對ox-LDL誘導的成纖維細胞遷移均有抑制作用，且呈濃度依賴性，各組間有顯著性差異，(F=23.947，P<0.01)；(3)氟伐他汀組可劑量依賴性抑制Ox-LDL誘導的HEFs的MCP-1表達和IL-1α、IL-6的合成，但各組仍較正常

16、對照組增加，差異有顯著性(P<0.05)；(4)IL-1α、IL-6的合成均與MCP-1的表達呈顯著正相關(相關系數(shù)分別為r=0.947，P<0.01及0.757，P<0.05) 結論：(1)氟伐他汀在降脂作用外能劑量依賴性的抑制ox-LDL誘導的成纖維細胞的遷移；(2)氟伐他汀降脂作用外能劑量依賴性抑制ox-LDL誘導的成纖維細胞MCP-1的表達及IL-1α和IL-6的合成；(3)氟伐他汀對ox-LDL誘導的成纖維細胞IL-1