ADSCs與β-TCP結合構建組織工程人工聽骨的實驗研究.pdf

1、目的：觀察豚鼠脂肪間充質干細胞(ADSCs)與β-磷酸三鈣(β-TCP)材料體外復合培養(yǎng)的結合程度，并分析其構建組織工程人工聽骨的可行性。
　　方法：(1)采用細胞差速貼壁法分離培養(yǎng)、純化豚鼠 ADSCs，使用流式細胞儀檢測 CD29、CD45、CD44進行間充質干細胞表面標記物鑒定。采用將第三代的ADSCs分別向成骨、成脂肪、成神經方向誘導分化；倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學變化，誘導后進行成骨、成脂肪、成神經特異鑒定，檢測其多向分

2、化能力。(2)將豚鼠ADSCs與β-TCP共培養(yǎng)7天，電鏡觀察體外培養(yǎng)的ADSCs與此種支架材料的復合情況；(3)將用Brdu標記后的豚鼠ADSCs與β-TCP復合培養(yǎng)7天后植入豚鼠聽泡模型，在12周取出組織工程人工聽骨進行病理學觀察及掃描電鏡觀察材料的成骨能力。
　　結果：(1)細胞培養(yǎng)的檢測：①ADSCs的檢測：第三代的ADSCs形態(tài)均一，呈單層生長，細胞多為長梭形，呈旋渦狀排列；其表面標記物CD29、CD44和CD45表達分

3、別為86.3％、55.5%、0.4%；②多向分化檢測：成骨誘導后倒置顯微鏡下可見細胞具有成骨細胞形態(tài)特征；茜素紅染色細胞間可見紅染的鈣結節(jié)，von-Kossa染色后可見大片棕褐色顆粒，堿性磷酸酶染液檢測染色后可見大片藍紫色顆粒。成脂誘導可見脂質滴的數(shù)量逐漸增多，油紅O染色可見脂質滴被染成紅色。成神經細胞誘導可見細胞慢慢聚成團狀，懸浮在培養(yǎng)液中，分裂增殖明顯迅速形成團狀的類神經球，貼壁后免疫熒光染色nestin陽性和GFAP陽性。此后更換

4、為成神經分化培養(yǎng)液，部分細胞胞體稍有回縮，并伸出少量細長突起，呈現(xiàn)類神經元樣改變，這些細胞少部分為NF200陽性表達。(2)體外復合培養(yǎng)7天后，電鏡下可見ADSCs貼附在材料表層，形態(tài)穩(wěn)定，生長旺盛，增殖力強，具有極佳的延伸性(3)回植后的組織工程人工12周HE染色后骨板間發(fā)現(xiàn)骨組織特異性的結構-骨陷窩，其內有骨細胞，無巨噬細胞和多核巨細胞存在，證明了組織工程人工聽骨已在體內向成骨方向轉化，且與周圍組織具有良好的生物相容性。免疫熒光染色