組織工程構(gòu)建新型腹壁修復(fù)材料的實驗研究.pdf

1、目的： (1)探討種植骨骼肌成肌細胞于Ⅰ型膠原/聚乳酸/乙醇酸支架,模擬力學(xué)環(huán)境和組織血供,構(gòu)建三維立體、具備有序肌纖維和收縮潛力的組織工程骨骼肌的可行性； (2)探討種植成纖維細胞于小腸粘膜下層,復(fù)加組織工程骨骼肌形成組織工程材料修復(fù)腹壁缺損的可行性； (3)探討組織工程材料與生物材料修復(fù)實驗動物腹壁缺損的療效優(yōu)劣、再生組織差異,探討進一步改進構(gòu)建方法的途徑。 方法： (1)制備種子細胞和支架材

2、料：①使用酶消化、差速貼壁法從乳鼠骨骼肌標本中分離純化成肌細胞培養(yǎng)；②使用酶消化從乳鼠皮膚中分離純化成纖維細胞培養(yǎng)；③按Abraham法制備豬小腸粘膜下層；④利用細胞形態(tài)學(xué)、免疫組化鑒定鑒定所制備種子細胞,利用免疫組化檢查制備的小腸粘膜下層。 (2)構(gòu)建組織工程材料,修復(fù)腹壁缺損：①成肌細胞接種于Ⅰ型膠原/PLGA混合凝膠,置于機械細胞刺激器中的力學(xué)環(huán)境,體外培養(yǎng)3周；②成纖維細胞接種于SIS,體外培養(yǎng)3周；③上述兩者復(fù)合預(yù)構(gòu)的

3、網(wǎng)膜血管網(wǎng),構(gòu)建組織工程腹壁修復(fù)材料；④制備大鼠全層腹壁缺損,分別使用組織工程材料或生物材料(3層SIS)修復(fù)；⑤觀察術(shù)后動物一般恢復(fù)情況,檢查術(shù)后不同時期修復(fù)腹壁的電生理特性；⑥分批處死動物,測定術(shù)后不同時期兩組修復(fù)后再生腹壁的腹壁厚度、抗張強度；⑦觀察術(shù)后不同時期修復(fù)區(qū)中心腹壁的組織結(jié)構(gòu)、細胞密度、細胞成分、血管化程度；確定組織工程材料修復(fù)后再生腹壁有否形態(tài)接近正常骨骼肌的肌肉層結(jié)構(gòu)、新生肌纖維是否與宿主肌纖維融合、有否肌球蛋白重鏈

4、表達；⑧統(tǒng)計分析。 結(jié)果： (1)成功構(gòu)建三維立體、肌纖維平行有序、具備收縮潛力的組織工程骨骼肌。 (2)成纖維細胞種植于SIS,復(fù)加組織工程骨骼肌構(gòu)建的組織工程材料治療腹壁缺損療效優(yōu)于生物材料；修復(fù)后的腹壁細胞密度更高、厚度更大、機械強度更高；具有纖維組織層和肌肉層結(jié)構(gòu)、表達肌球蛋白重鏈、存在肌電活動。生物材料在術(shù)后2月完全被纖維組織代替。 (3)術(shù)后3月,組織工程材料修復(fù)后腹壁厚度較2月時減少、肌電活

5、動強度也減低。 結(jié)論： (1)構(gòu)建三維立體、具有類似正常骨骼肌形態(tài)和收縮潛力的組織工程骨骼肌是可行的。 (2)組織工程材料修復(fù)腹壁缺損療效優(yōu)于生物材料,且能彌補生物材料修復(fù)后再生腹壁主要由纖維組織再生構(gòu)成、腹壁較正常腹壁薄、機械強度低、組織再生速度緩慢、血管化程度低等不足,有較好的發(fā)展前景。 (3)缺神經(jīng)支配,組織工程材料在體內(nèi)不能長久維持在最佳狀態(tài),需進一步改進構(gòu)建方法。 創(chuàng)新點： (1