PVA-ι-CA復(fù)合材料構(gòu)建組織工程軟骨的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：制備PVA/ι-CA復(fù)合材料并對性能進(jìn)行表征，通過ATDC-5與復(fù)合支架材料的共培養(yǎng)，觀察 ATDC-5在復(fù)合支架材料上的生物學(xué)行為。皮下植入復(fù)合支架材料，評價(jià)組織的局部反應(yīng)，包括早期的炎癥反應(yīng)和后期的血管化，進(jìn)而評價(jià)該復(fù)合材料的組織相容性及其用于構(gòu)建組織工程軟骨的可行性。
　　方法：1制備含不同卡拉膠（質(zhì)量分?jǐn)?shù)0％、5%、10%、20%、30%）的PVA/ι-CA復(fù)合膜材料和復(fù)合支架材料，并對支架材料的性能進(jìn)行表征。2將

2、HU-VEC與復(fù)合膜材料共培養(yǎng)，通過細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、SEM觀察細(xì)胞在材料上的生長及增殖狀況，篩選出最優(yōu)配比的復(fù)合支架材料做生物實(shí)驗(yàn)。3將 ATDC-5接種于優(yōu)選支架材料，復(fù)合培養(yǎng)7、14、21天，通過石蠟切片常規(guī)染色、掃描電鏡、觀察 ATDC-5在支架材料上的黏附、增殖情況，通過甲苯胺藍(lán)染色法、Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色、免疫熒光法檢測Ⅱ型膠原蛋白的表達(dá)。4將優(yōu)選復(fù)合支架材料植入SD大鼠皮下，術(shù)后1、2、3、4周，通過石蠟切片

3、常規(guī)HE染色、Masson染色、VG染色、Fli-1免疫組化及免疫熒光染色觀察，評價(jià)該復(fù)合支架材料的組織相容性、血管化能力及體內(nèi)降解情況。
　　結(jié)果：1制備的PVA/ι-CA復(fù)合支架材料呈三維多孔狀，具有良好的孔隙率。2 HU-VEC與復(fù)合膜材料共培養(yǎng)5天后掃描電鏡觀察結(jié)果示：隨著卡拉膠含量的增加，膜材料上的細(xì)胞數(shù)量逐漸增加，故優(yōu)選卡拉膠質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的復(fù)合支架材料進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。3 ATDC-5與支架材料的復(fù)合物 HE染色結(jié)果示：

4、ATDC-5在支架材料上貼附生長良好，呈多角形，形態(tài)飽滿；Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)及免疫熒光結(jié)果示：ATDC-5在支架材料上表達(dá)Ⅱ型膠原，證明支架材料上的ATDC-5仍保持軟骨細(xì)胞的特性。4皮下植入支架材料實(shí)驗(yàn)結(jié)果示：1周時(shí)無組織壞死現(xiàn)象，可見細(xì)胞向材料邊緣長入，并有少量的中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞散在分布，未見明顯的巨噬細(xì)胞、多核巨細(xì)胞；2周時(shí)細(xì)胞逐漸長入材料深部，炎性細(xì)胞減少；3周時(shí)部分材料內(nèi)部充滿成纖維細(xì)胞、毛細(xì)血管，并可見多核巨細(xì)胞及淋巴

5、細(xì)胞；4周時(shí)材料的孔結(jié)構(gòu)完整，但間隙出現(xiàn)纖細(xì)的膠原纖維，排列較規(guī)律，血管較前減少。
　　結(jié)論：1采用冷凍-解凍循環(huán)技術(shù)制備出了三維多孔聚乙烯醇-卡拉膠復(fù)合支架材料。2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明 ATDC-5能在聚乙烯醇-卡拉膠復(fù)合支架材料的表面和內(nèi)部黏附、生長及增殖，證實(shí)本支架材料無明顯細(xì)胞毒性，具有良好的細(xì)胞相容性。3皮下包埋實(shí)驗(yàn)表明聚乙烯醇-卡拉膠復(fù)合支架材料在體內(nèi)引起的炎癥反應(yīng)輕微，后期血管化良好，材料降解吸收緩慢，具有良好的生物相容性。