組織工程皮膚修復(fù)大鼠皮膚缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：將組織工程皮膚(TES)移植于SD大鼠全層皮膚缺損，旨在觀察創(chuàng)面愈合情況，從而探討TES修復(fù)皮膚缺損的可行性及有效性，并為TES的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象及分組：成年健康雌性清潔級(jí)SD大鼠64只，隨機(jī)分為4組，每組16只。A組(TES移植組)， B組(自體全厚皮片移植組)，C組(空白膠原膜片移植組)，D組(以凡士林紗布覆蓋創(chuàng)面)。 2 動(dòng)物全層皮膚缺損模型的建立：用常規(guī)手術(shù)方法于大鼠背部

2、切取全層皮膚形成圓形創(chuàng)面，直徑2.5cm，創(chuàng)面止血后，以生理鹽水紗布覆蓋備用。 3 手術(shù)方法：按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分別對(duì)各組動(dòng)物行手術(shù)覆蓋創(chuàng)而，使移植物與創(chuàng)面貼合緊密，創(chuàng)面四周絲線間斷縫合，并打包固定。術(shù)后動(dòng)物單籠常規(guī)飼養(yǎng)，間斷換藥。 4 術(shù)后觀察方法及指標(biāo)：(1)計(jì)算術(shù)后第4周A、B兩組皮片成活率(％)；(2)分別于術(shù)后15和30天用膠片網(wǎng)格法測(cè)量各組創(chuàng)面實(shí)際面積，計(jì)算創(chuàng)面愈合率(％)；(3)記錄各組創(chuàng)面完全愈合時(shí)間(d)。

3、 5 組織學(xué)觀察時(shí)相及取材方法：分別于術(shù)后10、20、30和40天，用直徑2.0mm角膜環(huán)鉆切取各移植區(qū)邊緣全層皮膚標(biāo)本，行HE染色，光鏡下觀察各組標(biāo)本組織結(jié)構(gòu)的變化。 6 統(tǒng)計(jì)分析：本研究所有數(shù)據(jù)均采用SAS V6.12統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用Fisher’s確切概率法檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，進(jìn)行方差分析(F檢驗(yàn))或T檢驗(yàn)。P<0.05，表示差別顯著。 結(jié)果： 1 移植部位情況

4、：A組：3例失敗，其余皮片成活，于術(shù)后35天時(shí)仍未發(fā)生排斥反應(yīng)，創(chuàng)面平整，彈性較好，部分有皮屑脫落，無明顯瘢痕形成，顏色與正常皮膚相似，與周圍皮膚融為一體，無毛發(fā)生長(zhǎng)。B組：失敗1例，其余皮片成活，術(shù)后30天左右創(chuàng)面愈合，無色素沉著，有皮屑脫落，有毛發(fā)生長(zhǎng)，皮片與周邊皮膚完全融合。C組：4例創(chuàng)面感染，空白膠原膜片逐漸降解或脫落，無法辨認(rèn)，創(chuàng)面瘢痕愈合。D組：1例動(dòng)物死亡，創(chuàng)面瘢痕愈合。 2 皮片成活率：術(shù)后4周A組皮片成活率為8

5、1.25％，B組為93.75％；組間比較兩者無顯著性差異(P>0.05)。 3 創(chuàng)面愈合率：術(shù)后15天各組創(chuàng)面愈合率分別為：A組75.54±6.85％，B組81.97±6.32％，C組41.90±4.94％，D組42.99±6.63％。術(shù)后30天各組創(chuàng)面愈合率分別為：A組94.23±8.86％，B組99.08±9.06％，C組80.07±6.55％，D組78.04±8.21％。術(shù)后15和30天分別做組間比較，A組創(chuàng)面愈合率均小于

6、B組(P<0.05)而明顯大于C組(P<0.01)和D組(P<0.01)；C組與D組間無差別(P>0.05)。 4 創(chuàng)面愈合時(shí)間：各組創(chuàng)面愈合時(shí)間分別為：A組33.8±4.6天，B組27.1±3.6天，C組45.5±5.9天，D組48.1±6.0天。組間比較A組創(chuàng)面愈合時(shí)間長(zhǎng)于B組(P<0.05)，明顯短于C組(P<0.01)和D組(P<0.01)；C組與D組間無差、別(P>0.05)。 5 組織學(xué)觀察：A組：表皮層較薄

7、，但結(jié)構(gòu)較完整，角化層不明顯，后表皮層逐漸增厚，層次逐漸清晰；真皮內(nèi)FB排列整齊，膠原纖維量逐漸增多，橫向排列有序，炎性細(xì)胞罕見，真皮內(nèi)有大量的血管生成，且新生血管腔逐漸擴(kuò)大、管壁逐漸增厚；表皮層與真皮層交界處可見釘突形成，兩層結(jié)構(gòu)結(jié)合緊密。B組：細(xì)胞層次清晰，組織結(jié)構(gòu)完整，與正常皮膚相似。C組和D組：創(chuàng)面有大量膠原纖維生長(zhǎng)，逐漸形成瘢痕組織。 結(jié)論： 1 TES具有表皮和真皮雙層結(jié)構(gòu)，類似于正常皮肽，又具備較好的物理性

8、狀，有一定的彈性、韌性、伸展性，適于手術(shù)操作，因此，可作為全層皮膚替代物修復(fù)皮膚缺損。 2 TES移植于皮膚創(chuàng)而后未發(fā)生明顯排斥反應(yīng)，能較早實(shí)現(xiàn)血管化，逐漸被改建并與受體創(chuàng)面組織融合，皮片成活率較高，與自體全厚皮膚移植無明顯差別，因此，用TES修復(fù)全層皮膚缺損是可行的。 3 TES修復(fù)的創(chuàng)而愈合時(shí)間較對(duì)照組明顯縮短，愈合效果也明顯好于對(duì)照組，說明TES有促進(jìn)創(chuàng)面愈合的作用。但與自體全厚皮膚移植相比，愈合時(shí)間仍較長(zhǎng)，效果欠

9、佳，說明TES在結(jié)構(gòu)和生理功能上與正常皮膚差別仍較大，距離構(gòu)建理想的永久性皮膚替代物還有很大差距。 4 TES移植失敗可能與其自身的局限性有關(guān)，TES在結(jié)構(gòu)和功能上都有一些缺陷，如缺乏免疫功能，抗感染能力較差：無血管系統(tǒng)，移植后血管化緩慢；表皮層較薄，真皮層與表皮層間的連接不夠穩(wěn)定，耐摩性較差；膠原支架的韌性及強(qiáng)度不如自體皮膚等，這些局限性降低了TES移植成活率。在不斷改進(jìn)TES構(gòu)建方法的同時(shí)，實(shí)際應(yīng)用時(shí)應(yīng)根據(jù)創(chuàng)面情況和TES的