BMP2誘導豚鼠MSCs分化成骨細胞制備組織工程人工聽骨的實驗研究.pdf

1、目的：觀察豚鼠骨髓間充質干細胞（MSCs）與納米羥基磷灰石（nHA）材料體外復合培養(yǎng)的結合程度，并分析其構建組織工程人工聽骨的可行性。
　　 方法：①采用細胞差速貼壁法分離培養(yǎng)、純化豚鼠骨髓間充質干細胞，使用流式細胞儀檢測CD29、CD45、CD44進行間充質干細胞表面標記物鑒定。采用骨形態(tài)發(fā)生蛋白2（BMP2）將第三代的MSCs誘導分化為成骨細胞；倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學變化，誘導后免疫組化染色和成骨誘導并檢測其成骨細胞分化

2、能力；②將骨髓間充質干細胞與納米羥基磷灰石共培養(yǎng)1天，3天，5天，7天，10天，電鏡觀察體外培養(yǎng)的骨髓間充質干細胞與此種支架材料的復合情況；③將復合培養(yǎng)5天的支架材料植入豚鼠聽泡模型，分別在2周、4周、8周、10周、12周取出組織工程人工聽骨進行病理學觀察及掃描電鏡觀察材料的成骨能力。
　　 結果：⑴細胞培養(yǎng)的檢測：①MSCs的檢測：第三代的MSCs形態(tài)均一，呈單層生長，細胞多為長梭形，呈旋渦狀排列；其表面標記物CD29、CD4

3、4和CD45表達分別為95.7%、70%、0.7%；②成骨細胞檢測：誘導后倒置顯微鏡下可見細胞具有成骨細胞形態(tài)特征；免疫組化I型膠原檢測可觀察到細胞內有黃褐色顆粒沉淀，堿性磷酸酶染色見細胞胞漿內出現(xiàn)藍紫色顆粒，茜素紅染色時可見被染成紅色的誘導成骨細胞形成的鈣結節(jié)；⑵體外復合培養(yǎng)3天后，可見大量骨髓間充質干細胞貼附在材料表層，并且形態(tài)穩(wěn)定，生長旺盛，增殖力強，具有極佳的延伸性；培養(yǎng)5天后可見材料表面已全部覆蓋骨髓間充質干細胞，細胞結合緊密

4、，細胞表面可見大量分泌顆粒，胞體明顯增大，邊緣完整，呈纖維樣伸長；7天后細胞逐漸從材料表面脫落，仍附在材料表面的細胞出現(xiàn)“星形”改變，“偽足”增多；10天后細胞呈片狀脫落；⑶病理學觀察到回植10周后的組織工程人工聽骨被大量纖維結締組織包裹，與周圍組織相融合；回植12周的人工聽骨能譜分析及掃描電鏡觀察可見材料表面形成了骨陷窩，微量元素含量測定與正常骨組織幾乎相同。
　　 結論：說明納米羥基磷灰石材料保持了它良好的生物相容性，利于細