重組人凋亡素2配體(rh-Apo2L)免疫原性研究.pdf

1、目的：
　　評價重組人凋亡素2配體（rh-Apo2）在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）患者中的的免疫原性及其對療效的潛在影響。
　　方法：
　　1．將重組人凋亡素2配體(rh-Apo2L)用包被液稀釋成10μg/L，包被96孔板，向各孔加入50μl待檢血清樣品，同時設(shè)陽性和陰性對照孔，各孔加入相應(yīng)的辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體。終止反應(yīng)后，在酶標(biāo)儀上讀取各孔450nm處的吸光度(OD)值。以同樣本血清用藥前OD值2.1倍作為產(chǎn)生抗

2、體的閾值，凡給藥后血清標(biāo)本測得的OD值大于或等于閾值者，判定為陽性。
　　2.取對數(shù)生長期生長良好的肺癌細(xì)胞A549，以2.5×104個細(xì)胞/mL接種于96孔板，每孔200μL；以相應(yīng)組別藥物分別干預(yù)細(xì)胞24h、48h后，采用MTT法檢測各組細(xì)胞生長情況，計算細(xì)胞生長抑制率。
　　3.取對數(shù)生長期生長良好的肺癌細(xì)胞A549，以7.5x104/mL接種于25mL培養(yǎng)瓶，加培養(yǎng)液至5mL，以相應(yīng)組別藥物分別干預(yù)細(xì)胞48h后，采用

3、流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測計算各組細(xì)胞凋亡率的變化。
　　4．統(tǒng)計學(xué)方法：計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，比較不同組別之間差異性用兩因素重復(fù)測量資料方差分析或者是單因素方差分析；使用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件對所獲數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，所有結(jié)果均以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1．ELISA檢測結(jié)果顯示：對照組患者在使用rh-Apo2L/安慰劑前后，均未發(fā)現(xiàn)有針對rh-Apo2L的抗體產(chǎn)生；實驗組患者在

4、使用rh-Apo2L/安慰劑前，亦均未發(fā)現(xiàn)有針對rh-Apo2L的抗體產(chǎn)生。而用藥后，2例患者血清中檢測到抗rh-Apo2L抗體IgM陽性，3例患者血清中檢測到抗rh-Apo2L抗體IgG陽性，1例患者血清中檢測到抗rh-Apo2L抗體IgE陽性。另有1例患者在進(jìn)行藥物（rh-ApoL）皮膚過敏試驗中結(jié)果為陽性。
　　2．MTT法檢測結(jié)果顯示，TRAIL單藥組、TRAIL+陰性血清組、TRAIL+陽性血清（IgM）組、TRAIL+

5、陽性血清（IgG）組各組藥物干預(yù)24h、48h后，各組均呈現(xiàn)一定程度的細(xì)胞抑制與細(xì)胞凋亡。但是各組間肺癌細(xì)胞A549細(xì)胞抑制率與凋亡率相比較，差異均不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。表明各組的待檢血清中均未檢測到中和抗體的產(chǎn)生。
　　3．流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示：TRAIL單藥組、TRAIL+陰性血清組、TRAIL+陽性血清（IgM）組、TRAIL+陽性血清（IgG）組各組干預(yù)48h后，均呈現(xiàn)一定程度的細(xì)胞凋亡。與空白組組相比，采用

6、單因素方差分析，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。但是，TRAIL單藥組、TRAIL+陰性血清組、TRAIL+陽性血清（IgM）組、TRAIL+陽性血清（IgG）組各組間肺癌細(xì)胞A549凋亡率相比較，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.564>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1．rh-Apo2L對人可能具有一定的免疫原性，但是但所檢測到的結(jié)合抗體不具有中和活性，表明該免疫原性并不會減弱藥物的活性以及與活性相關(guān)的毒性。
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