rh-Apo2L聯(lián)合長春瑞濱誘導人肺鱗癌細胞凋亡及相關機制的實驗研究.pdf

1、目的：
　　觀察rh-Apo2L、長春瑞濱及兩藥聯(lián)合對人肺鱗癌細胞（SK-MES-1）的增殖抑制和凋亡作用；探討rh-Apo2L聯(lián)合長春瑞濱誘導人肺鱗癌細胞（SK-MES-1）凋亡的相關機制。
　　方法：
　　1、檢測rh-Apo2L、長春瑞濱分別對人肺鱗癌細胞株（SK-MES-1細胞）的體外增殖影響：采用CCK-8法檢測不同濃度的rh-Apo2L、長春瑞濱干預SK-MES-1細胞24小時和48小時后，各組細胞的增殖抑

2、制情況，計算藥物半數(shù)抑制濃度（IC50），并選擇亞毒性藥物濃度用于后續(xù)實驗研究。
　　2、檢測rh-Apo2L、長春瑞濱對人肺鱗癌細胞株（SK-MES-1細胞）的凋亡作用：取對數(shù)生長期的SK-MES-1細胞分為四組，分別為空白對照組、rh-Apo2L組、長春瑞濱組、r h-Apo2L聯(lián)合長春瑞濱組，給予相應藥物干預24小時后，在顯微鏡動態(tài)觀察細胞形態(tài)學變化，并采用AnnexinV-FITC/PI雙染流式細胞技術檢測各組細胞凋亡情況

3、。
　　3、檢測不同組的凋亡相關蛋白的表達情況：采用Western blot技術檢測上述分組藥物干預SK-MES-1細胞24小時后，細胞凋亡相關蛋白DR4、DR5、Caspase-3表達的情況。
　　結果：
　　1、CCK-8法檢測結果顯示：rh-Apo2L在體外對人肺鱗癌SK-MES-1細胞的增殖具有抑制作用，其抑制作用與藥物濃度之間呈劑量-效應正相關，計算得到24h、48h rh-Apo2L的IC50分別為28.5

4、7μg/ml、8.97μg/ml；長春瑞濱在體外也對SK-MES-1細胞的增殖具有較強的抑制作用，其抑制作用與藥物濃度之間呈劑量-效應正相關，計算得到24h、48h長春瑞濱的IC50分別為27.30μg/ml、7.87μg/ml。rh-Apo2L聯(lián)合長春瑞濱對SK-MES-1細胞的生長抑制作用，與單藥組比較明顯增強，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05），計算出24h、48h聯(lián)合組兩藥相互作用指數(shù)（q值）分別為1.937和2.400，提示rh-

5、Apo2L與長春瑞濱兩藥聯(lián)合對SK-MES-1細胞的抑制作用具有協(xié)同性。
　　2、流式細胞計量術結果顯示：rh-Apo2L與長春瑞濱聯(lián)合應用干預24h后，人肺鱗癌SK-MES-1細胞早期凋亡率為25.64％，與rh-Apo2L單藥組（16.80%）、長春瑞濱單藥組（5.93%）相比，早期細胞凋亡率顯著增加，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）；rh-Apo2L與長春瑞濱聯(lián)合應用干預24h后，聯(lián)合組SK-MES-1細胞晚期凋亡率為49.2

6、4%，與rh-Apo2L單藥組（11.96%）、長春瑞濱單藥組（31.38%）相比，晚期細胞凋亡率顯著增加，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　3、蛋白印跡法檢測結果顯示：與空白對照組、rh-Apo2L單藥組相比，長春瑞濱單藥組及兩藥聯(lián)合組上調了凋亡相關蛋白DR4、DR5表達，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）；兩藥聯(lián)合組與其他組相比，兩藥聯(lián)合組的Caspase-3表達增加，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　結論：