動(dòng)物源大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌耐藥表型與氯霉素類抗菌藥物耐藥基因型的研究.pdf

1、目的：
　　大腸桿菌廣泛存在于自然界中，多數(shù)情況下以正常腸道菌群存在于人和動(dòng)物中?，F(xiàn)今大腸桿菌作為畜禽對(duì)抗生素耐藥性的重要指示菌之一。沙門(mén)氏菌病是公共衛(wèi)生學(xué)上具有重要意義的人畜共患病之一，目前發(fā)現(xiàn)血清型多達(dá)兩千多種。動(dòng)物中，雞為沙門(mén)氏菌主要感染的源頭，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致其死亡。金黃色葡萄球菌為自然界中分布最為廣泛的化膿性細(xì)菌之一，可導(dǎo)致人或動(dòng)物局部膿腫、敗血癥、膿毒血癥等。近十幾年來(lái)，為了預(yù)防和治療細(xì)菌性疾病，促進(jìn)動(dòng)物的發(fā)育及生長(zhǎng)，大量

2、的抗菌藥物應(yīng)用于集約化養(yǎng)殖場(chǎng)或個(gè)體養(yǎng)殖戶中?？咕幬镩L(zhǎng)期、廣泛、不合理的使用，以及抗菌藥物的選擇壓力等原因促使大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌耐藥菌株不斷增加，耐藥譜不斷擴(kuò)大，甚至有些菌株對(duì)尚未用于臨床治療的新型抗菌藥物也表現(xiàn)出了耐藥性。氯霉素類抗菌藥物是一類廣譜類抗生素，由于氯霉素毒性較強(qiáng)，2002年我國(guó)把氯霉素列為獸用禁藥，氟苯尼考作為新一代氯霉素類抗菌藥物被廣泛地使用于動(dòng)物細(xì)菌性疾病上。因此，對(duì)動(dòng)物源大腸桿菌、沙門(mén)氏菌以及金黃色

3、葡萄球菌耐藥菌株、耐藥表型的流行情況以及氯霉素類抗菌藥物耐藥基因的分布情況特征進(jìn)行研究，并分析相關(guān)性，對(duì)臨床獸醫(yī)及公共衛(wèi)生學(xué)有著積極的意義，為遏制大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌耐藥性的發(fā)展，指導(dǎo)獸醫(yī)臨床用藥上有重要意義，并為進(jìn)一步研究氯霉素類抗菌藥物的耐藥機(jī)制奠定了一定的基礎(chǔ)。
　　方法：
　　本試驗(yàn)從2014年9月到2016年3月，在重慶市北碚區(qū)、合川區(qū)、榮昌區(qū)和墊江區(qū)等地的13個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）分別采集大腸桿菌、沙門(mén)氏菌

4、和金黃色葡萄球菌樣品，通過(guò)革蘭氏染色觀察形態(tài)學(xué)特征、PCR方法檢測(cè)鑒定分離大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌。采用紙片擴(kuò)散法，測(cè)定最終所分離鑒定的大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌對(duì)30種抗菌藥物的敏感性。再運(yùn)用PCR技術(shù)，檢測(cè)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌的氯霉素類抗菌藥物的耐藥基因：flor、clmA、fexA、fexB、cat、pexA和cfr7種基因。分析綜合所有菌株的耐藥表型與耐藥基因型之間的關(guān)系與符合率。
　　結(jié)果

5、：
　　最終在重慶市北碚區(qū)、合川區(qū)、榮昌區(qū)和墊江縣等部分地區(qū)采集大腸桿菌樣品1003份，分離大腸桿菌695株，分離率為69.3%，其中雞源393株、豬源194株、牛源108株；沙門(mén)氏菌樣品867份，分離沙門(mén)氏菌66株，分離率為7.6%，其中雞源31株、豬源26株、牛源9株；金黃色葡萄球菌樣品926份，共分離103株，分離率為11.1%，其中雞源64株、豬源29株、牛源7株；共計(jì)菌株總數(shù)為864株。
　　藥敏結(jié)果顯示，大腸桿菌

6、、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌對(duì)30種抗菌藥物均呈現(xiàn)不同程度的耐藥。其中大腸桿菌的平均耐藥率在6.2%~91.4%之間，大腸桿菌對(duì)青霉素G、氨芐西林等4種抗生素的耐藥率超過(guò)了70%；對(duì)氧氟沙星、阿米卡星耐藥率在20%以下。沙門(mén)氏菌的平均耐藥率在9.1%~100.0%之間，沙門(mén)氏菌對(duì)青霉素G、氨芐西林等5種抗生素的耐藥率均在85%以上；對(duì)氧氟沙星、頭孢他啶、阿米卡星的耐藥率在20%以下。金黃色葡萄球菌的平均耐藥率在12.6%~79.6%之間，

7、金黃色葡萄球菌對(duì)青霉素G、氨芐西林等4種抗生素的耐藥率在70%以上；對(duì)頭孢他啶、頭孢唑啉等8種抗生素的耐藥率不超過(guò)20%。大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌均呈現(xiàn)出不同程度的多重耐藥，大腸桿菌多重耐藥最高為29耐的菌株2株，最低為0耐的菌株1株；沙門(mén)氏菌多重耐藥最高為27耐的菌株1株，最低為4耐的菌株1株；金黃色葡萄球菌多重耐藥最高為25耐的菌株1株，最低為2耐的菌株有3株。從不同地區(qū)采集分離的大腸桿菌對(duì)30種抗菌藥物的的耐藥率來(lái)看，墊

8、江縣分離菌株的耐藥率普遍高于北碚區(qū)、合川區(qū)和榮昌區(qū)；沙門(mén)氏菌不同地區(qū)對(duì)不同抗菌藥物呈現(xiàn)不同程度的耐藥；金黃色葡萄球菌，北碚區(qū)分離菌株的耐藥率普遍低于合川區(qū)、榮昌區(qū)和墊江縣。不同動(dòng)物源大腸桿菌的耐藥率，其中雞源普遍高于豬源，豬源普遍高于牛源；不同動(dòng)物源沙門(mén)氏菌的耐藥率分布情況與大腸桿菌相似，雞源耐藥率最高，豬源次之，牛源耐藥率最低；不同動(dòng)物源金黃色葡萄球菌除對(duì)個(gè)別幾類抗生素的牛源、兔源的耐藥率稍高以外，雞源的耐藥率普遍高于其他幾類。從不同

9、季節(jié)采集分離大腸桿菌的耐藥率得出，春季耐藥率高于夏季，秋季耐藥率高于夏季，冬季耐藥率再次稍微降低；沙門(mén)氏菌中，菌株對(duì)21種抗菌藥物的耐藥率高達(dá)100.0%，夏季、秋季、冬季間耐藥率沒(méi)有太大差異。不同季節(jié)分離的金黃色葡萄球菌四季間耐藥率的變化與大腸桿菌相似。
　　耐藥基因電泳結(jié)果顯示，695株大腸桿菌中檢測(cè)出flor基因408株，檢出率為58.7%；clmA基因403株，檢出率為58.0%；cat基因257株，檢出率為37.0%；c

10、fr基因6株，檢出率為0.9%。66株沙門(mén)氏菌中檢測(cè)出flor基因45株，檢出率為68.2%；clmA基因41株，檢出率為62.1%；cat基因52株，檢出率為78.8%；cfr基因2株，檢出率為3.0%。金黃色葡萄球菌中檢測(cè)出flor基因28株，檢出率為27.2%；clmA基因33株，檢出率為32.0%；cat基因45株，檢出率為43.7%；cfr基因1株，檢出率為1.0%；fexA基因43株，檢出率41.7%。本試驗(yàn)未檢測(cè)到fexB

11、和pexA基因。
　　大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌檢測(cè)出耐藥基因的菌株的耐藥表型與耐藥基因型符合率均超過(guò)50%，其中大腸桿符合的菌株數(shù)為356株，符合率為59.6%；沙門(mén)氏菌符合的菌株數(shù)為58株，符合率為93.5%；金黃色葡萄球菌的菌株數(shù)為51株，符合率為67.1%。大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌未檢測(cè)出耐藥基因的菌株的耐藥表型與耐藥基因型符合率，其中大腸桿菌符合的菌株數(shù)為68株，符合率為69.4%；沙門(mén)氏菌符合的菌株數(shù)

12、為2株，符合率為50.0%；金黃色葡萄球菌符合的菌株數(shù)為9株，符合率為33.3%。
　　結(jié)論：
　　本試驗(yàn)菌株樣品采集時(shí)間為2014年9月至2016年3月，分別從重慶市北碚區(qū)北龍公司屠宰場(chǎng)、重慶市長(zhǎng)水禽業(yè)發(fā)展有限公司、重慶市合川區(qū)奶牛養(yǎng)殖戶陳兆強(qiáng)和重慶市榮昌區(qū)“重慶市種豬場(chǎng)”等13個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)采集大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌菌株樣品。
　　大腸桿菌分離率為69.3%、沙門(mén)氏菌分離率為7.6%、金黃色葡萄球菌分離率為1

13、1.1%。
　　大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌對(duì)30種抗菌藥物呈現(xiàn)不同程度的耐藥，大部分菌株存在多重耐藥的現(xiàn)象。且均對(duì)青霉素G、萬(wàn)古霉素等4種抗生素的耐藥程度最為嚴(yán)重，耐藥率較高，均超過(guò)70%；對(duì)阿米卡星耐藥率較低，低于20%。
　　大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌對(duì)flor、clmA和cat基因的檢出率相對(duì)較高，其中clmA為攜帶菌株數(shù)最多的耐藥基因。未在本試驗(yàn)中檢測(cè)出fexB和pexA基因。
　　大腸桿菌、沙