上海市食源性金黃色葡萄球菌分離株的耐藥表型和基因型特征.pdf

1、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是引起多種人畜共患病和食物中毒的常見病原菌?？股厥侵委熡杉毦鸬母黝惣膊〉挠行幬?然而,隨著抗生素的大量使用,細菌的耐藥性逐漸增強。耐藥金黃色葡萄球菌,尤其是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌( Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)已經(jīng)成為臨床治療的重要難題。耐藥菌可以通過食物鏈廣泛傳播,最終危害人類健康。對食品中金黃色

2、葡萄球菌的耐藥性進行監(jiān)測并對其耐藥機理進行研究具有十分重要的意義。鑒于以上原因,本論文的主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　一、收集并整理135株金黃色葡萄球菌食品分離株,食品樣品來自上海市各大農(nóng)貿(mào)市場及超市、市郊奶牛場,食品種類涉及生奶、生鮮肉、果蔬、速凍食品等。根據(jù)2012年美國臨床實驗室標準化協(xié)會(CLSI)標準M100-S22,采用紙片擴散法測定以上分離株對18種抗生素的藥物敏感性情況。采用頭孢西丁紙片法進行MRSA菌株的初篩。

3、結(jié)果顯示,135株金黃色葡萄球菌食品分離株對青霉素G的耐藥率最高,達到74.8％;其次為紅霉素,為52.6%;此外,對環(huán)丙沙星、克林霉素、四環(huán)素、土霉素等抗生素的耐藥率均超過20%;所有菌株對利福平、亞胺培南、萬古霉素等均敏感;檢出MRSA共10株,檢出率為7.4%。
　　二、位于細菌染色體或可移動元件上的耐藥基因是細菌產(chǎn)生耐藥性的主要原因。本研究采用PCR技術(shù)檢測14種耐藥基因的分布情況。結(jié)果顯示,攜帶率最高的是 gyrA、gr

4、lA、norA,其攜帶率分別為93.3%,93.3%和87.4%;其次為blaTEM,攜帶率為78.5%;oxa、mecA等耐藥基因的攜帶率均低于10%。其中blaTEM、tetM、oxa、mecA、vanA共5種耐藥基因的攜帶情況能夠指示細菌在表型上是否耐藥。
　　三、為了探究菌株之間的相關(guān)性,采用三種分型方法進行多態(tài)性研究。結(jié)果顯示,在耐藥譜分型中,將所有菌株分為62個耐藥譜型,最主要的耐藥譜型表現(xiàn)為對青霉素 G、紅霉素、環(huán)丙

5、沙星、克林霉素四種抗生素同時耐藥,這樣的多重耐藥(MDR)菌株有63株,占46.7%。該方法主要強調(diào)了菌株之間的表型差異,分型效果并不理想;在Ward最小方差法聚類分析中,將所有菌株分為26個類群,此種分型方法可以更好地分析連續(xù)型變量,具備較好的分型效果;在spa基因分型中,將所有菌株分為33個spa型,其中最主要的spa型是t189和t091,共發(fā)現(xiàn)5個新的spa型。
　　四、為了進一步探究喹諾酮類抗生素耐藥性的形成與耐藥基因突

6、變的相關(guān)性,采用E-test法測定環(huán)丙沙星的最低抑菌濃度(MIC);PCR擴增gyrA和grlA基因,產(chǎn)物測序后進行同源比對。結(jié)果顯示,135株金黃色葡萄球菌食品分離株對環(huán)丙沙星的耐藥率為32.6%,grlA和gyrA基因的攜帶率均為93.3%,突變率分別為37.3%和54.0%,如果只有 grlA發(fā)生突變則只會導(dǎo)致菌株低水平耐藥性的形成,如果 gyrA和grlA同時發(fā)生突變將會導(dǎo)致金黃色葡萄球菌的高水平耐藥。
　　以上研究結(jié)果在