牛奶中金黃色葡萄球菌的分型和毒力基因分布研究.pdf

1、S.aureus是生鮮牛奶潛在的食品安全隱患。采集泰安周邊地區(qū)個(gè)體奶戶(hù)中的未經(jīng)處理的生鮮牛奶樣品，分離鑒定樣品中S.aureus，并結(jié)合分子分型、毒力基因篩查、醋酸氯己定MIC試驗(yàn)、抗生素藥敏試驗(yàn)等試驗(yàn)技術(shù)，綜合評(píng)估生鮮牛奶中S.aureus分子分型、毒力基因分布、醋酸氯己定耐受性和抗生素抗性，以期為乳制品風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及質(zhì)量控制提供指導(dǎo)和借鑒。主要研究成果和結(jié)論如下:
　　1.生鮮牛奶中S.aureus的分離鑒定
　　通過(guò)形態(tài)學(xué)

2、和分子生物學(xué)鑒定，從125份生鮮牛奶樣品中分離鑒定出S.aureus共51株，檢出率達(dá)40.8％。并根據(jù)mecA基因篩查結(jié)果，鑒定其中9株為MRSA。
　　2.生鮮牛奶中S.aureus對(duì)抗生素抗性研究
　　采用藥敏紙片法測(cè)定51株S.aureus對(duì)抗生素抗性。其中對(duì)紅霉素的耐藥率達(dá)52.9％，對(duì)克林霉素、四環(huán)素和環(huán)丙沙星耐藥率達(dá)33.3％、37.3％和31.4％，對(duì)利福平、慶大霉素、左氧氟沙星、阿米卡星、氨芐西林/舒巴坦耐

3、藥率為3.9-19.6％。未發(fā)現(xiàn)有對(duì)替考拉寧、利奈唑胺和萬(wàn)古霉素耐藥的S.aureus。
　　3.生鮮牛奶中S.aureus的spa分型研究
　　51株S.aureus進(jìn)行spa分型實(shí)驗(yàn)，共分為10個(gè)型，為t518、t519、t521、t2875、t377、t127、t189、t114、t437、t2460。MSSA中t518、t519和t521數(shù)量較多，分別有17株、10株和7株;MRSA中t114數(shù)量最多共有6株。本研究

4、同時(shí)檢出在人群中定植傳播的spa型t114和t437。生鮮牛奶生產(chǎn)、加工及運(yùn)輸中存在的人為污染增加其安全隱患。
　　4.生鮮牛奶中MRSA的SCCmec分型和PFGE分型研究
　　對(duì)9株MRSA進(jìn)行PFGE聚類(lèi)和SCCmec盒區(qū)分。SCCmec分型結(jié)果顯示，t114與t437為SCCmecⅢ型，t2460為SCCmecⅣ型。從生鮮牛奶中分離到的MRSA主要為SCCmecⅢ型。PFGE聚類(lèi)共分5個(gè)PFGE簇（按80％相似度），

5、包括一個(gè)簇（3株MRSA，3個(gè)PFGE型），另一個(gè)簇（3株MRSA，2個(gè)PFGE型）和3個(gè)單菌株P(guān)FGE型。生鮮牛奶分離MRSA的PFGE型多樣。
　　5.生鮮牛奶中S.aureus的毒力基因分布研究
　　采用PCR技術(shù)對(duì)51株S.aureus進(jìn)行毒力基因篩查。攜帶較多的是腸毒素基因sea(15.7％)、seb(25.5％)和seh(17.6％)。此外，sec、seg、sei、tsst及etb均有一定數(shù)量的陽(yáng)性株檢出。

6、>　　6.生鮮牛奶中S.aureus的消毒劑外排泵基因分布和醋酸氯己定MIC研究
　　S.aureus中篩查到1株攜帶消毒劑外排泵基因qacA/B，其醋酸氯己定MIC為4mg/L。未發(fā)現(xiàn)其他消毒劑外排泵基因smr、qacG、qacJ、qacH。MSSA中醋酸氯己定MIC分別是8mg/L（4株）、4mg/L（30株）、2mg/L（5株）和1mg/L（3株），MRSA中醋酸氯己定MIC分別是8mg/L（2株）、4mg/L（5株）、2m