NK細(xì)胞活化性受體配體在結(jié)腸癌細(xì)胞的表達(dá)與NK細(xì)胞殺傷敏感性的關(guān)系.pdf

1、目的：
　　1.研究NK細(xì)胞活化性受體配體CD155、CD112及MICA/B在結(jié)腸癌細(xì)胞系的表達(dá)情況，并嘗試聯(lián)合應(yīng)用不同細(xì)胞因子上調(diào)相關(guān)配體表達(dá)。
　　2.觀察新鮮結(jié)腸癌組織中CD155、CD112及MICA/B的表達(dá)情況。
　　3.NK細(xì)胞殺傷結(jié)腸癌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。
　　4.NK細(xì)胞殺傷結(jié)腸癌細(xì)胞機(jī)制研究。
　　方法：
　　1.結(jié)腸癌細(xì)胞系Colo205、SW116及SW480培養(yǎng)于含10％胎牛血清的R

2、PMI1640培養(yǎng)基中，EDTA常規(guī)傳代，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行活細(xì)胞免疫熒光染色，F(xiàn)CM檢測(cè)CD155、CD112及MICA/B的表達(dá)情況。
　　2.取手術(shù)切除的新鮮結(jié)腸癌組織，OCT包埋，液氮凍存，-20℃切片，應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)新鮮結(jié)腸癌組織CD155、CD112及MICA/B的表達(dá)情況。
　　3.NK92細(xì)胞培養(yǎng)于含12.5％胎牛血清及12.5％馬血清的αDMEM培養(yǎng)基中。將NK92細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞，三種結(jié)腸癌細(xì)胞系作

3、為靶細(xì)胞，按照效靶比5：1調(diào)整細(xì)胞濃度后，采用CFSE法檢測(cè)NK細(xì)胞的殺傷水平。
　　4.NK細(xì)胞殺傷結(jié)腸癌細(xì)胞的機(jī)制研究。取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期NK92細(xì)胞以及三種結(jié)腸癌細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)分為：NK細(xì)胞組（未經(jīng)任何誘導(dǎo)活化）、NK細(xì)胞＋Colo205組、NK細(xì)胞＋SW116組、NK細(xì)胞＋SW480組,在各組中自實(shí)驗(yàn)開(kāi)始即加入CD107a-PE-Cy5單抗，以及同型無(wú)關(guān)IgG1-PE-Cy5對(duì)照單抗，在37℃，5％CO2環(huán)境下

4、孵育6小時(shí)，充分洗滌2次后固定待檢，對(duì)比觀察未經(jīng)誘導(dǎo)的NK細(xì)胞與經(jīng)過(guò)不同細(xì)胞系誘導(dǎo)活化后的NK細(xì)胞脫顆粒情況之間的差異。
　　結(jié)果：
　　1.CD155在Colo205、SW116和SW480三種結(jié)腸癌細(xì)胞系的表達(dá)分別為：79.3％、95.1％及92.7％；CD112在Colo205、SW116和SW480三種結(jié)腸癌細(xì)胞系的表達(dá)分別為：99.3％、98.7％及47.1％；MICA/B在Colo205、SW116和SW480三

5、種結(jié)腸癌細(xì)胞系的表達(dá)分別為：4.8％、29.7％及85.5％。
　　2.共檢測(cè)12例新鮮結(jié)腸癌組織，CD155陽(yáng)性表達(dá)6例（50％）其中強(qiáng)陽(yáng)性3例（25％）；CD112陽(yáng)性表達(dá)5例（41.7％）其中強(qiáng)陽(yáng)性1例（8.3％）；MICA/B陽(yáng)性表達(dá)3例（25％），其中強(qiáng)陽(yáng)性1例（8.3％）。
　　3.CFSE法測(cè)得NK92細(xì)胞對(duì)Colo205、SW116和SW480三種細(xì)胞系的殺傷比率分別為：54.6％、52.6％、47.1％。<

6、br>　　4.NK細(xì)胞組CD107a表達(dá)率為41％；NK細(xì)胞＋Colo205組CD107a表達(dá)率為68.4％；NK細(xì)胞＋SW116組CD107a表達(dá)率為93.5％；NK細(xì)胞＋SW480組CD107a表達(dá)率為97.1％。
　　結(jié)論：
　　1.NK細(xì)胞活化性受體配體CD155、CD112及MICA/B在三種結(jié)腸癌細(xì)胞系的表達(dá)率較高，其中CD226的配體CD155/CD112在結(jié)腸癌細(xì)胞的表達(dá)率較NKG2D的配體MICA/B顯著高

7、。
　　2.新鮮分離的結(jié)腸癌細(xì)胞中，均查見(jiàn)三種配體的表達(dá)，與細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的結(jié)果基本一致，其中CD155/CD112在結(jié)腸癌細(xì)胞的表達(dá)率較MICA/B顯著高。
　　3.CFSE法測(cè)得NK92細(xì)胞對(duì)三種結(jié)腸癌細(xì)胞的殺傷率較高，提示了NK細(xì)胞可能是通過(guò)其膜表面活化性受體CD226及NKG2D與相應(yīng)受體結(jié)合后活化，從而發(fā)揮殺傷結(jié)腸癌細(xì)胞的作用。
　　4.NK細(xì)胞在殺傷結(jié)腸癌細(xì)胞時(shí)，其CD107a的表達(dá)率明顯升高，提示NK細(xì)胞可能主