攜BDNF基因慢病毒轉(zhuǎn)染ADSCs體外研究.pdf

1、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）是一類具有神經(jīng)調(diào)控能力的神經(jīng)營養(yǎng)因子，對神經(jīng)細胞存活及生長發(fā)育起促進作用；并且其人體內(nèi)含量最高，受體分布最廣，同時能促進其他神經(jīng)營養(yǎng)因子的釋放，增強神經(jīng)細胞的生存能力。但是，目前應用BDNF治療疾病存在限制：BDNF無法透過血腦或血眼屏障，因此全身給藥后難以到達病變位置；而且其半衰期短，即使局部注射，也需反復注射。因此合適的傳遞載體是突破BDNF治療限制的關(guān)鍵。脂肪間充質(zhì)干細胞（ADSCs）屬成體多能干細胞

2、的一種，具有來源豐富、易于提取、無倫理道德問題及多向分化潛能等優(yōu)點。研究表明ADSCs易于外源目的基因的轉(zhuǎn)入，兼其向損傷部位定向遷移的特性，是.一種良好的傳遞載體。而且ADSCs的干細胞特性對疾病治療起協(xié)同作用。因此本課題構(gòu)建了持續(xù)表達外源BDNF基因的ADSCs細胞系，實現(xiàn)BDNF基因的持續(xù)表達，研究對疾病治療的作用機制。
　　本課題采用膠原蛋白酶消化法，將獲得的ADSCs分離純化并進行其增殖、表面標志的鑒定及成脂成骨能力測試。

3、ADSCs為長梭形細胞，貼壁旋渦式生長，具有多向分化潛能。表面標志鑒定結(jié)果表明其干細胞表面標志陽性表達，而陰性表達造血、吞噬和上皮表面標記物等，符合間充質(zhì)干細胞鑒定標準。用攜帶增強綠色熒光蛋白（EGFP）基因和新霉素（Neo）基因為篩選因子的外源BDNF基因的重組慢病毒轉(zhuǎn)染ADSCs,通過熒光篩選和G418藥物篩選，得到穩(wěn)定細胞株BDNF-ADSCs。流式測試、多向分化能力鑒定及菌落形成單位分析結(jié)果表明，BDNF轉(zhuǎn)入未改變其干細胞特性及