shRNA LKB1慢病毒載體構建、轉染和表達的研究.pdf

1、目的：
　　構建針對人LKB1(liver kinase B1，或STK11 serine/threonine protein kinase11)基因的特異性短發(fā)卡RNA（short hairpin RNA，shRNA）表達的慢病毒載體，并觀察轉染人肝癌細胞Huh7后對LKB1 mRNA和蛋白的表達。
　　方法：
　　根據(jù)人LKB1的基因信息，設計3條針對LKB1基因cds區(qū)的siRNA序列，同時設計1條negativ

2、e序列用于RNAi陰性對照（Negative Control,NC），組建與shRNA相對應的4對互補的單鏈DNA。將合成的序列插入空載體GV115（元件順序為：hU6-MCS-CMV-EGFP）中，重組獲得慢病毒載體。進行測序鑒定后，再轉染293T細胞產(chǎn)生病毒液，得到的病毒液再轉染肝癌細胞株Huh7。熒光顯微鏡觀察轉染后細胞的情況，實時熒光定量PCR檢測轉染后細胞LKB1 mRNA的表達情況，Western印跡法檢測轉染后細胞LKB1