二甲雙胍對妊娠期糖尿病小鼠母代和跨代代謝功能的影響及機(jī)制.pdf

1、目的：妊娠期糖尿?。℅estational diabetes mellitus，GDM）是指妊娠期間首次發(fā)生或者發(fā)現(xiàn)的糖代謝異常，是一種常見的妊娠期疾病。近年來我國GDM發(fā)病率逐漸增高達(dá)17.5%。相對于快速增長的發(fā)病率，GDM的臨床治療藥物卻十分有限。二甲雙胍是當(dāng)前全球治療2型糖尿病最廣泛的口服降糖藥之一，但目前二甲雙胍對母兒的影響尤其是遠(yuǎn)期影響知之甚少，缺乏相關(guān)基礎(chǔ)研究。因此本研究通過創(chuàng)建GDM小鼠模型，研究二甲雙胍對GDM小鼠母代

2、及跨代代謝功能影響及機(jī)制。
　　方法：
　?。?）利用Leprdb/+轉(zhuǎn)基因小鼠和C57BL/6J高脂（HFD）喂養(yǎng)小鼠進(jìn)行GDM表型驗證。驗證模型期間，稱量孕鼠體質(zhì)量，測量孕鼠口服葡萄糖耐量試驗（OGTT）、空腹血糖水平、空腹胰島素水平和瘦素水平，以及解剖孕鼠對生理表型指標(biāo)進(jìn)行對比，以確定GDM小鼠模型成功。
　?。?）給予GDM孕鼠二甲雙胍干預(yù)，研究二甲雙胍對GDM孕鼠糖脂代謝的影響及機(jī)制。干預(yù)后稱量GDM小鼠孕期

3、體質(zhì)量，并測定口服葡萄糖耐量試驗以及空腹血糖、胰島素、瘦素、血脂水平；解剖孕鼠對生理表型指標(biāo)進(jìn)行對比；肝臟蘇木精-伊紅（HE）染色和油紅-O染色觀察肝臟脂肪變性；Western blotting檢測肝臟組織和肌肉組織中腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、乙酰輔酶A羧化酶（ACC）、磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、以及絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族成員（細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、

4、P38）等信號分子的表達(dá)差異；RT-PCR分析AMPKα1、ACC、Akt1、腫瘤壞死因子α（TNFα）、白介素-1β（IL-1β）和白介素-6（IL-6）mRNA在肝臟組織和肌肉組織中的表達(dá)差異。
　?。?）建立GDM小鼠傳代模型，制造子一代（F1）和子二代（F2）。喂養(yǎng)F1代小鼠至26周，于3周齡和20周齡分別給予高脂飼料（HFD）喂養(yǎng)第二次打擊；喂養(yǎng)F2代小鼠至28周，于22周給予HFD喂養(yǎng)第二次打擊。每周稱量F1和F2代體

5、質(zhì)量，測量第二次打擊前后OGTT和胰島素耐量試驗（ITT），解剖F1代和F2代小鼠對生理表型指標(biāo)進(jìn)行對比；測量F2代小鼠第二次打擊前后動脈收縮壓。
　　結(jié)果：
　?。?）Leprdb/+轉(zhuǎn)基因小鼠第一次妊娠和第二次妊娠均無糖耐量受損、胰島素抵抗等GDM表型；HFD飲食誘導(dǎo)C57BL/6J小鼠妊娠期出現(xiàn)糖耐量異常、胰島素抵抗、超重、胎鼠質(zhì)量/胎盤質(zhì)量比值增高等GDM典型表型。故Leprdb/+轉(zhuǎn)基因小鼠模型失敗，HFD飲食誘導(dǎo)

6、小鼠GDM模型成功。
　?。?）母代研究中：二甲雙胍可明顯改善GDM小鼠葡萄糖耐量水平和胰島素抵抗水平；降低GDM小鼠體質(zhì)量、降低血清甘油三酯、（TG）、游離脂肪酸（fFA）、低密度脂蛋白濃度（LDL）濃度。二甲雙胍可以改善肝臟脂肪變性。二甲雙胍可以增加肝臟和肌肉組織磷酸化AMPK、磷酸化ACC、磷酸化PI3K、磷酸化Akt、磷酸化JNK、磷酸化ERK、磷酸化P38蛋白表達(dá)。二甲雙胍可顯著降低GDM小鼠肝臟和肌肉組織TNFα、IL

7、-β、IL-6等mRNA表達(dá)。
　?。?）子代研究中；二甲雙胍干預(yù)GDM小鼠后可使F1代雄性小鼠HFD打擊后遠(yuǎn)期體質(zhì)量降低、葡萄糖耐量升高和胰島素抵抗降低；不同宮內(nèi)背景的F1代雄性小鼠與相同母系基因背景小鼠交配后發(fā)現(xiàn)，HFD打擊后二甲雙胍可跨代降低F2代雄性小鼠體質(zhì)量、增加葡萄糖耐量、減低動脈收縮壓等。
　　結(jié)論：
　　（1）Leprdb/+轉(zhuǎn)基因小鼠不再是自發(fā)性GDM小鼠模型；HFD飲食誘導(dǎo)C57BL/6J小鼠可作為