花生肽的酶法制備及其生理活性研究.pdf

1、本研究以低溫脫溶的花生粕制得的花生蛋白粉為原料，采用現(xiàn)代生物技術(shù)對(duì)花生蛋白進(jìn)行酶解制備具有特殊生理活性的花生短肽。研究涉及對(duì)酶解工藝條件的優(yōu)化、酶解產(chǎn)物的精制、產(chǎn)物的物化和功能性質(zhì)研究等，主要研究結(jié)果如下： 1.花生蛋白的單酶水解研究 選用Alcalase堿性蛋白酶、Protamex中性蛋白酶、1398中性蛋白酶和N120P蛋白酶對(duì)花生蛋白進(jìn)行單酶水解實(shí)驗(yàn)，通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)確定Alcalase堿性蛋白酶作為花生蛋白第一步水

2、解的工具酶。并利用二次回歸旋轉(zhuǎn)組合試驗(yàn)中的四因素(1/2實(shí)施)方案來(lái)確定Alcalase蛋白酶的最優(yōu)水解工藝參數(shù)。由回歸模型確定Alcalase的最適工藝條件為水解溫度54.7℃，底物濃度6％，酶用量0.943％，水解時(shí)間為167min，酶解物的NSI值(酸沉)為75.02％。 2.復(fù)合酶對(duì)花生蛋白的水解研究 分別用Protamex復(fù)合酶，1398中性蛋白酶，N120P蛋白酶對(duì)花生蛋白Alcalase水解物繼續(xù)作用，通過(guò)

3、NSI值和凝膠過(guò)濾圖譜顯示N120P酶的繼續(xù)作用有利于生成更多的短肽。由正交實(shí)驗(yàn)確定N120P酶用量1.0％，反應(yīng)溫度55℃，反應(yīng)時(shí)間180min，水解液的NSI值達(dá)到82.79％。最后再用Flavourzyme風(fēng)味蛋白酶對(duì)復(fù)合酶解液進(jìn)行脫苦，酶用量0.6％，作用時(shí)間120min，苦味評(píng)分值達(dá)到9.0。 3.超濾分級(jí)和大孔樹(shù)脂脫鹽工藝中操作參數(shù)的確定 確定了超濾的工藝參數(shù)：使用5K的膜超濾時(shí)，料液濃度為2.7mg/ml，

4、溫度40℃，過(guò)膜壓力20-25psi；使用1K的膜超濾時(shí)，料液濃度為2.7mg/ml，溫度40℃，過(guò)膜壓力為20psi。 確定了用大孔樹(shù)脂對(duì)花生肽進(jìn)行靜態(tài)脫鹽的工藝參數(shù)。吸附條件：料液濃度4.58mg/ml，溫度40℃，振蕩速率90r/min；解吸條件：洗脫液70％乙醇，溫度30℃，振蕩速率120r/min。 4.酶解產(chǎn)物的分子量分布 超濾后的產(chǎn)物通過(guò)SephadexG-25和SephadexG-15凝膠分離，結(jié)

5、果顯示復(fù)合酶對(duì)花生蛋白作用后所得的肽主要是由一些分子量低于5K的小肽組成。 5.花生肽清除自由基和ACE抑制活性的研究 分子量小于1K的花生肽和分子量在1K-5K之間的花生肽對(duì)超氧陰離子自由基(O2-·)、羥自由基(·OH)和二苯代苦味肼基自由基(DPPH)的清除作用較強(qiáng)，均強(qiáng)于分子量大于5K的花生肽。此研究結(jié)果對(duì)于花生肽作為保健品的開(kāi)發(fā)利用，具有積極意義。分子量小于1K的花生肽有較強(qiáng)的抗高血壓活性，當(dāng)花生肽的濃度為為0