以銀翹藥對為對象探討建立中藥藥效物質(zhì)快速發(fā)現(xiàn)的方法.pdf

1、金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或帶初開的花,連翹為木犀科植物連翹Forsythia suspense(Thunb.)Vahl的干燥果實[1],二者均為常用清熱解毒中藥。金銀花清熱解毒,偏于上半身之熱；而連翹清熱解毒,散結(jié)消腫,便于透達全身之熱。二藥配伍,清熱解毒力量倍增,流通氣血以消腫散結(jié)止痛,且銀翹藥對是臨床上公認的常用有效藥對。
　　 所以本課題在總結(jié)前人研究工作的基礎(chǔ)之上,

2、以銀翹藥對為示范性研究對象,探討建立適宜于復(fù)雜體系--中藥或中藥復(fù)方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)快速發(fā)現(xiàn)的方法。該模式的核心思想是:建立在“入血成分才可能是藥效成分”的基礎(chǔ)之上,通過比較研究銀翹藥對在大鼠腸管外翻模型中的吸收成分和其在大鼠體內(nèi)入血成分之間的相關(guān)關(guān)系,從而采用體外吸收模型來替代整體動物模型的可行性研究,達到初步建立快速、簡便和低成本的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)快速發(fā)現(xiàn)的方法。
　　 圍繞著本課題核心思想,對銀翹藥對的主要藥效作用,銀翹藥對有效

3、部位體內(nèi)外過程,金銀花、連翹以及銀翹藥對藥材配伍后的化學(xué)成分變化和體內(nèi)外過程,金銀花、連翹、銀翹藥對藥材煎煮過程的化學(xué)成分變化、銀翹藥對水溶性化學(xué)成分研究等進行了較系統(tǒng)的研究,以期探討建立適宜于復(fù)雜體系--中藥或中藥復(fù)方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)快速發(fā)現(xiàn)的方法,初步揭示銀翹藥對可能的藥效物質(zhì)基礎(chǔ),為對銀翹藥對進行有效和科學(xué)的質(zhì)量控制提供部分依據(jù)。
　　 在藥效學(xué)方面,采用巴豆油致小鼠耳廓腫脹模型和酵母致大鼠發(fā)熱模型篩選金銀花、連翹以及銀翹藥

4、對藥材不同配伍比例的抗炎解熱作用,試驗結(jié)果表明:銀翹藥對的抗炎解熱作用均優(yōu)于單味藥金銀花和連翹,在銀翹藥對藥材不同的配伍比例中,銀翹藥對1:1的抗炎解熱作用優(yōu)于銀翹藥對藥材的其它配伍比例。在得到銀翹藥對藥材最佳配伍比例的基礎(chǔ)上,采用巴豆油致小鼠耳廓腫脹模型和酵母致大鼠發(fā)熱模型篩選銀翹藥對1:1,其大孔樹脂水洗部位和乙醇洗部位的抗炎解熱作用,試驗結(jié)果表明:銀翹藥對1:1的大孔樹脂乙醇洗脫部位的抗炎解熱作用優(yōu)于其水洗部位,且優(yōu)于原藥(銀翹藥

5、對藥材1:1)。
　　 在得到銀翹藥對有效部位之后,本論文以銀翹藥對有效部位為研究對象,初步探討建立了適宜于復(fù)雜體系--中藥或中藥復(fù)方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)快速發(fā)現(xiàn)的
　　 方法。主要包括了以下內(nèi)容:銀翹藥對有效部位在Caco-2細胞模型中的吸收,結(jié)果發(fā)現(xiàn):Caco-2細胞吸收模型所提供的信息量相對較少。為了得到更多的信息,采用大鼠腸管外翻模型來研究銀翹藥對有效部位的吸收,結(jié)果發(fā)現(xiàn):大鼠腸管外翻模型能吸收銀翹藥對有效部位中的主要

6、色譜峰。為了說明直接采用大鼠腸管外翻模型來研究銀翹藥對的合理性,將銀翹藥對直接灌胃后,不同時間點取在體大鼠胃液和腸液樣品進行HPLC-DAD分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn):銀翹藥對在大鼠灌胃后,在胃腸液中沒有新的主要色譜峰產(chǎn)生或消失,說明直接采用大鼠腸管外翻模型來研究銀翹藥對有效部位的吸收是可行的。為了探討銀翹藥對的藥效物質(zhì)基礎(chǔ),研究了銀翹藥對有效部位的入血成分,試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn):銀翹藥對有效部位的主要入血成分與大鼠腸管外翻模型中的主要吸收成分一致。為了進

7、一步驗證銀翹藥對的藥效物質(zhì)基礎(chǔ),研究了銀翹藥對有效部位在大鼠組織臟器中的分布,結(jié)果發(fā)現(xiàn)銀翹藥對主要在心和肺中有分布,且心肺中分布的主要色譜峰與大鼠腸外翻吸收模型中的主要吸收成分一致。綜合上面的試驗結(jié)果可知:銀翹藥對的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)可能是入血成分中的主要色譜峰,銀翹藥對有效部位的主要入血成分與腸外翻模型中的主要吸收成分一致,說明以銀翹藥對為研究對象,初步建立了采用體外吸收模型來替代整體動物模型的可行性研究,達到了初步建立快速、簡便和低成本的

8、藥效物質(zhì)基礎(chǔ)快速發(fā)現(xiàn)的方法,給中藥或中藥復(fù)方質(zhì)量控制提供了一定的依據(jù)。
　　 在建立該藥效物質(zhì)基礎(chǔ)快速發(fā)現(xiàn)的方法之后,研究了金銀花、連翹以及銀翹藥對藥材不同配伍比例的樣品在大鼠腸管外翻模型中的吸收,試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn):在大鼠腸管外翻模型中,金銀花、連翹以及銀翹藥對藥材不同配伍比例樣品的主要色譜峰都能吸收進入小腸段,在吸收過程中并沒有主要成分的產(chǎn)生或消失,證明了上述所建立的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)快速發(fā)現(xiàn)方法的技術(shù)適應(yīng)性,同時也說明了主要色譜峰之間

9、的比例關(guān)系影響銀翹藥對的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　 因此接下來對金銀花、連翹以及銀翹藥對藥材不同配伍比例樣品在人工胃腸液中進行了孵育,結(jié)果發(fā)現(xiàn):經(jīng)人工胃液和人工腸液孵育后的金銀花、連翹及銀翹藥對藥材不同配伍比例樣品的主要色譜峰都能在相應(yīng)的藥材樣品中找到歸屬,在孵育過程中并沒有量大成分的產(chǎn)生或消失,但經(jīng)人工腸液孵育后樣品的主要色譜峰面積均高于經(jīng)人工胃液孵育后相應(yīng)樣品的相應(yīng)色譜峰面積,說明人工胃腸液能夠影響樣品中主要色譜峰的比例。

10、　　 為了深入探討銀翹藥對的藥效物質(zhì)基礎(chǔ),富集主要藥效成分的量,接下來研究了銀翹藥對水溶性化學(xué)成分。首先采用HPLC—DAD研究金銀花、連翹和銀翹藥對1:1之間的化學(xué)成分差異,試驗結(jié)果表明:銀翹藥對1:1中的主要色譜峰都能歸屬到單味金銀花和連翹中,并沒有明顯的新色譜峰產(chǎn)生和消失,提示可以通過研究單味藥金銀花和連翹的水溶性化學(xué)成分來實現(xiàn)銀翹藥對的水溶性化學(xué)成分研究。因此,接下來對單味藥金銀花和連翹的水溶性成分進行了研究。采用溶劑法和各種

11、色譜分離技術(shù),對金銀花、連翹的水溶性成分進行了較為系統(tǒng)的研究。從金銀花中分離得到16個化合物,鑒定了16個化合物,包括6個環(huán)烯醚萜苷,5個三萜皂苷,2個黃酮、3個其它類。其中3-O-β-D-glucopyranosyl hederagenin28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-[β-D-xylopy-ranosyl-(1→6)]-β-D-glucopyranosylester和3-O-β-D-glucopyran

12、osyl-28-O-[a-L-rham-nopyranosyl-(1→2)-[β-D-xylo-pyranosyl-(1→6)]-β-D-glucopyranosyl]oleanolic acid為新化合物；2,6-dimethyl-6-hydroxyl-2,7-diene—1-octyl alcohol glucopyranoside為首次從該屬植物中分離得到；獐芽菜苷,loganin和centauroside為首次從該種中分離得到。

13、從連翹水煎劑中分離得到了18個化合物,鑒定了15個,包括4個木脂素類、3個有機酸類、2個黃酮、其它類6個其中吳茱萸次堿為首次從該屬植物中分離得到。
　　 本研究是在中醫(yī)藥學(xué)理論和實踐的指導(dǎo)下,將天然藥物化學(xué)、分析化學(xué)、藥理學(xué)、藥代動力學(xué)等手段相結(jié)合,研究了銀翹藥對的主要藥效、配伍變化、化學(xué)成分以及體內(nèi)外過程,初步闡明銀翹藥對的可能藥效物質(zhì)基礎(chǔ),為中藥或中藥復(fù)方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究模式提供了很好的參照方法和思路,為中藥現(xiàn)代化做了有意